人口腔鳞癌细胞的应用

背景^[1-3]

人口腔鳞癌细胞是一种常用于研究和治疗口腔癌的细胞。

人口腔鳞癌细胞是从口腔鳞状细胞癌患者体内分离出来的细胞，具有肿瘤细胞的特性，如快速增殖、侵袭和转移等。这些细胞被广泛用于研究口腔癌的生物学特征、药物筛选和肿瘤治疗等。

人口腔鳞癌细胞可以用于制作口腔癌细胞系，用于研究口腔癌的发生、发展机制，以及探索新的治疗手段。通过研究这些细胞在体外和体内的行为，可以帮助科学家们更好地理解口腔癌的生物学特征，以及开发更有效的治疗策略。

此外，人口腔鳞癌细胞还可以用于制作肿瘤模型，以模拟人类口腔癌的生长和转移。这些模型对于研究肿瘤的生物学、测试药物疗效以及研究肿瘤与宿主之间的相互作用都具有重要的意义。

人口腔鳞癌细胞

人口腔鳞癌细胞培养步骤：

一．人口腔鳞癌细胞培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸钠0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）人口腔鳞癌细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）人口腔鳞癌细胞冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．人口腔鳞癌细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）人口腔鳞癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）人口腔鳞癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

应用^[4][5]

人口腔鳞癌细胞可以用于PGRN对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

通过增强或抑制颗粒蛋白前体的表达来阐明其对人口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响,以从体外探究PGRN在口腔鳞状细胞癌发生发展中的作用。

研究方法:1、敲减及过表达PGRN稳定转染细胞系的构建:构建包含PGRN干扰序列及包含PGRN全长序列慢病毒载体,分别对口腔鳞癌细胞CAL27、SCC15进行转染,分组为:敲减组(shPGRN)、敲减对照组(shNC)、过表达组(oePGRN)、过表达对照组(oeNC);real-time PCR验证敲低PGRN及过表达PGRN的效果。

2、敲减及过表达PGRN对细胞增殖、迁移、侵袭的影响:通过CCK-8法及平板克隆形成实验检测敲减及过表达PGRN对细胞生长及增殖的影响;通过Transwell迁移实验及划痕实验确定敲减及过表达PGRN对细胞迁移的影响;通过Transwell基底膜侵袭实验确定敲减及过表达PGRN对细胞侵袭的影响。

3、利用免疫组化方法检测12例口腔鳞癌患者癌及癌旁组织中PGRN的表达情况是否存在差异。

结果:1、免疫组织化学结果显示PGRN在口腔鳞癌中较癌旁表达上调。

2、通过real-time PCR从基因水平验证构建成功敲减及过表达PGRN的口腔鳞癌细胞系,并筛选出干扰序列LV-GRN-RNAi21856-1、LV-GRN-RNAi21857-1效果更佳,慢病毒转染时感染复数(MOI)为5。

3、在口腔鳞癌细胞系CAL27、SCC15中敲低PGRN后,与对照组相比生长明显减慢,克隆形成实验显示集落形成减少。迁移实验表明细胞迁移能力明显下降。Transwell实验表明能穿过小室及基质胶的细胞数明显减少。

4、在口腔鳞癌细胞系CAL27、SCC15中过表达PGRN后,与对照组相比生长明显增快,克隆形成实验显示集落形成增多。迁移实验表明细胞迁移能力明显上升。Transwell实验表明能穿过小室及基质胶的细胞数明显增多。

结论:PGRN可增强口腔鳞癌细胞(CAL27、SCC15)的生长增殖、迁移和侵袭能力,对口腔鳞癌的发生发展起促进作用。

参考文献

[1]Distinct roles of hnRNPH1 low-complexity domains in splicing and transcription..Kim Ga Hye;Kwon Ilmin.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,2021

[2]Identification of heterogenous nuclear ribonucleoproteins(hnRNPs)and serine-and arginine-rich(SR)proteins that induce human papillomavirus type 16 late gene expression and alter L1 mRNA splicing.Hao,Chengyu;Gong,Lijing;Cui,Xiaoxu;Jönsson,Johanna;Zheng,Yunji;Wu,Chengjun;Kajitani,Naoko;Schwartz,Stefan.Archives of Virology,2021

[3]Novel oxindole/benzofuran hybrids as potential dual CDK2/GSK-3βinhibitors targeting breast cancer:design,synthesis,biological evaluation,and in silico studies..Eldehna Wagdy M;AlRashood Sara T;AlWarhi Tarfah;Eskandrani Razan O;Alharbi Amal;El Kerdawy Ahmed M.Journal of enzyme inhibition and medicinal chemistry,2021

[4]HNRNPU promotes the progression of hepatocellular carcinoma by enhancing CDK2 transcription.Liang Yi;Fan Yao;Liu Yu;Fan Hui.Experimental Cell Research,2021

[5]徐文惠.PGRN对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响[D].山东大学,2023.