人浆细胞白血病的应用

背景^[1-3]

人浆细胞白血病细胞是一种人浆细胞白血病细胞系，来源于一名患有IgG浆细胞白血病的患者的外周血。这种细胞系被广泛用于研究浆细胞白血病以及相关的治疗策略。

人浆细胞白血病细胞具有淋巴母细胞样形态，悬浮生长，并且对EBV转化后的B淋巴母细胞具有相似的特性。这种细胞系也被用作建立异种移植物模型的基础，以便研究人类白血病的发生和发展机制，以及评估新的治疗药物和方法的疗效。

人浆细胞白血病细胞

人浆细胞白血病细胞培养步骤：

一．人浆细胞白血病细胞培养基及培养冻存条件准备：

1)准备：DMEM+10%FBS+1%P/S

2)培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液：50%basal medium+40%FBS+10%DMSO。

二．人浆细胞白血病细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

注：次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

3）人浆细胞白血病细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为例；

1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物（mingzhoubio）按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

人浆细胞白血病细胞可以用于黄芪多糖对慢性粒细胞白血病患者浆细胞样树突状细胞功能的影响

浆细胞样树突状细胞(Plasmacytoid dendritic cells,pDC)在体内作为树突状细胞(dendritic cells,DC)的一个亚型,发挥着重要的免疫学效应,是近来研究的热点。pDC在其不成熟的前体阶段,受到病毒或CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)刺激后能产生大量的干扰素α(interferon-α,IFN-α)发挥非特异的免疫学效应;在通过病毒、CpG ODN刺激或CD40L、IL-3作用分化成熟后,具有一定的抗原递呈功能而获得适应性免疫效应,是连接先天的非特异性免疫与后天获得性免疫的桥梁。

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是造血干细胞的恶性增殖性疾病,患者体内存在着一系列的免疫学异常。IFN-α治疗CML疗效确切,能使一部分患者获得细胞遗传学缓解及分子生物学缓解。黄芪是一种传统的补益类中药,味甘、性温,含有多种生物活性物质,其中多糖成分的免疫活性尤为突出,它能够提高细胞免疫及体液免疫,抑制肿瘤生长,增强免疫功能低下模型小鼠的免疫功能,并对细胞因子有一定的调节作用。

但是目前还没有黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)影响浆细胞样树突状细胞功能的研究报道。本实验通过体外实验研究黄芪多糖对慢性粒细胞白血病患者浆细胞样树突状细胞的功能影响,为进一步阐明黄芪多糖的免疫学活性及其在临床的应用提供依据,为以pDC为基础的免疫治疗寻找新的免疫佐剂。

方法:Ficoll密度梯度离心法分离初诊未治(A组)及缓解期(B组)的CML患者外周血单个核细胞,将A、B组中所得细胞均分为a、b两组,b组用MACS法将pDC去除,细胞依次标记为Aa、Ab、Ba、Bb组,分别向各组中加入不同剂量APS(Aa1、Ab1、Ba1、Bb1:0mg/l;Aa2、Ab2、Ba2、Bb2:50mg/l;Aa3、Ab3、Ba3、Bb3:100mg/l;Aa4、Ab4、Ba4、Bb4:200mg/l),同时加入CDG-ODN2216共孵育24小时;ELISA法检测上清液中IFN-α、IL-6、TNF-α浓度。

结果:本实验应用CML患者外周血来源的pDC,通过体外实验证明了黄芪多糖能够提高缓解期的CML患者pDC分泌的IFN-α、IL-6、TNF-α量及初诊未治慢性期CML患者pDC分泌的IL-6、TNF-α量,并且呈黄芪多糖浓度依赖性(P＜0.05)。结论:本实验结果证实了黄芪多糖能够增强CML患者pDC的功能。

参考文献

[1]Characterization of AMN107,a selective inhibitor of native and mutant Bcr-Abl.Ellen Weisberg;;Paul W.Manley;;Werner Breitenstein;;Josef Brüggen;;Sandra W.Cowan-Jacob;;Arghya Ray;;Brian Huntly;;Doriano Fabbro;;Gabriele Fendrich;;Elizabeth Hall-Meyers;;Andrew L.Kung;;Jürgen Mestan;;George Q.Daley;;Linda Callahan;;Laurie Catley;;Cara Cavazza;;Azam Mohammed;;Donna Neuberg;;Renee D.Wright;;D.Gary Gilliland;;James D.Griffin.Cancer Cell,2005

[2]IPC:Professional Type 1 Interferon-Producing Cells and Plasmacytoid Dendritic Cell Precursors.Yong-Jun Liu.Annual Review of Immunology,2005

[3]Plasmacytoid dendritic cell precursors/type I interferon-producing cells sense viral infection by Toll-like receptor(TLR)7 and TLR9.Tomoki Ito;;Yui-Hsi Wang;;Yong-Jun Liu.Springer Seminars in Immunopathology,2004

[4]Plasmacytoid dendritic cells activate allergen-specific T H 2 memory cells:Modulation by CpG oligodeoxynucleotides.Lorant Farkas;;Espen O Kvale;;Finn-Eirik Johansen;;Frode L Jahnsen;;Fridtjof Lund-Johansen.The Journal of Allergy and Clinical Immunology,2004

[5]刘立民.黄芪多糖对慢性粒细胞白血病患者浆细胞样树突状细胞功能的影响[D].兰州大学,2011.