MDA-MB-468的应用

背景^[1-3]

MDA-MB-468是一种常用于乳腺癌研究的细胞系，由Cailleau等人于1977年从一位51岁患有转移性乳腺癌的非洲女性胸腔积液中分离得到。这种细胞系具有一些独特的生物学特性，例如高侵袭性和快速增殖，以及在裸鼠中引发异种移植肿瘤的能力。此外，MDA-MB-468细胞系还与neu基因和表皮生长因子受体（EGFR）过度表达有关，这使得它们成为研究乳腺癌发生和发展的理想模型。

MDA-MB-468

在培养MDA-MB-468细胞时，会遇到一些问题，例如细胞黏附情况不佳、不适合某些培养方法以及容易死亡等。为了解决这些问题，需要选择适合的培养基和添加剂，并确保细胞在培养过程中维持其特定的生物学特性。例如，可以使用含有10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）的DMEM培养基来培养MDA-MB-468细胞。此外，为了增加细胞的存活率和黏附性，还可以添加一些生长因子或胶原蛋白等添加剂。

总之，MDA-MB-468细胞系是一种重要的乳腺癌研究模型，在了解乳腺癌的生物学特性、研究治疗方法和药物作用等方面都具有重要的应用价值。然而，培养这种细胞需要一定的技巧和经验，需要不断优化和改进培养条件，以确保细胞的生长和维持。

MDA-MB-468细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）MDA-MB-468细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。

该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：

1.收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）MDA-MB-468细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

应用^[4-5]

MDA-MB-468可以用于丝胶蛋白靶向Akt诱导TNBC MDA-MB-468细胞自噬

观察丝胶蛋白对TNBC MDA-MB-468细胞PI3K/Akt/m TOR信号转导通路相关指标,及自噬相关指标的影响,探讨丝胶是否通过靶向Akt诱导MDA-MB-468细胞自噬。

方法:1.将MDA-MB-468细胞随机分为三组:空白对照组、8mg/ml丝胶蛋白组(丝胶组)、8mg/ml丝胶蛋白+Akt激活剂SC79组(丝胶+SC79组)。空白对照组以DMEM培养基培养24h;丝胶组以8mg/ml丝胶蛋白作用24h;丝胶+SC79组以8mg/ml丝胶+10μM Akt激动剂SC79作用24h。

2. 实时荧光定量PCR法检测各组MDA-MB-468细胞PI3K、Akt、m TOR、LC3、P62、ATG5、Beclin1 m RNA表达水平的变化。

3. 蛋白印迹实验检测各组MDA-MB-468细胞PI3K、Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、P62、ATG5、Beclin1蛋白表达水平,以及LC3II/I的变化。

4. 免疫荧光染色检测各组MDA-MB-468细胞LC3、P62的定位与荧光强度的变化。

结果:1.丝胶蛋白对MDA-MB-468细胞PI3K表达水平的影响与空白对照组相比较,丝胶组、丝胶+SC79组PI3K的m RNA表达水平显著降低(P<0.05);丝胶+SC79组与丝胶组比较PI3K的m RNA表达水平无明显差异(P>0.05)。与空白对照组相比较,丝胶组、丝胶+SC79组PI3K的蛋白表达水平显著降低(P<0.05);丝胶+SC79组与丝胶组比较PI3K的蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。

2. 丝胶蛋白对MDA-MB-468细胞Akt、m TOR表达水平的影响丝胶组与空白对照组比较Akt、m TOR的m RNA表达水平均显著降低(P<0.05);丝胶+SC79组与丝胶组比较Akt、m TOR的m RNA表达水平均显著增高(P<0.05)。丝胶组与空白对照组比较Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);丝胶+SC79组与丝胶组比较Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR的蛋白表达水平均显著增高(P<0.05)。

3. 丝胶蛋白对MDA-MB-468细胞P62、Beclin1、ATG5表达水平,以及LC3II/I的影响丝胶组与空白对照组比较LC3、Beclin1、ATG5的m RNA表达水平均显著增高(P<0.05);丝胶+SC79组与丝胶组比较LC3、Beclin1、ATG5的m RNA表达水平均显著降低(P<0.05)。丝胶组与空白对照组比较P62的m RNA表达水平著降低(P<0.05);丝胶+SC79组与丝胶组比较P62的m RNA表达水平显著增高(P<0.05)。丝胶组与空白对照组比较Beclin1、ATG5的蛋白表达水平及LC3II/I显著增高(P<0.05);丝胶+SC79组与丝胶组比较Beclin1、ATG5的蛋白表达水平及LC3II/I显著降低(P<0.05);丝胶组与空白对照组比较P62的蛋白表达水平显著降低(P<0.05);丝胶+SC79组与丝胶组比较P62的蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。

4. LC3与P62蛋白定位及荧光强度LC3染色后结果显示:细胞核经DAPI核染后呈现浅蓝色,LC3蛋白为绿色荧光。丝胶组与空白对照组比较平均荧光强度显著增高(P<0.05);丝胶+SC79组与丝胶组比较平均荧光强度显著下降(P<0.05)。P62染色后结果显示:细胞核经DAPI核染后呈现浅蓝色,P62蛋白为绿色荧光,丝胶组与空白对照组平均荧光强度显著下降(P<0.05);丝胶+SC79组与丝胶组比较平均荧光强度显著增强(P<0.05)。

参考文献

[1]Discovery of a small molecule ligand of FRS2 that inhibits invasion and tumor growth..Santhana Kumar Karthiga;Brunner Cyrill;Schuster Matthias;Kopp Levi Luca;Gries Alexandre;Yan Shen;Jurt Simon;Moehle Kerstin;Bruns Dominique;Grotzer Michael;Zerbe Oliver;Schneider Gisbert;Baumgartner Martin.Cellular oncology(Dordrecht),2022

[2]The mechanisms and roles of selective autophagy in mammals..Vargas Jose Norberto S;Hamasaki Maho;Kawabata Tsuyoshi;Youle Richard J;Yoshimori Tamotsu.Nature reviews.Molecular cell biology,2022

[3]Triple negative breast cancer:approved treatment options and their mechanisms of action..Mandapati Aditya;Lukong Kiven Erique.Journal of cancer research and clinical oncology,2022

[4]Adiponectin ameliorates lung ischemia-reperfusion injury through SIRT1-PINK1 signaling-mediated mitophagy in type 2 diabetic rats..Jiang Tao;Liu Tianhua;Deng Xijin;Ding Wengang;Yue Ziyong;Yang Wanchao;Lv Xiangqi;Li Wenzhi.Respiratory research,2021

[5]李金尧.丝胶蛋白靶向Akt诱导TNBC MDA-MB-468细胞自噬[D].承德医学院,2023.