SW 626的应用

背景^[1-3]

SW 626是由A.Leibovitz于1974年1月在德克萨斯州坦普尔的Scott and White诊所从一名46岁女性高加索人卵巢的囊腺癌手术标本中建立的。尽管最初被认为是源自卵巢，但最近的报告表明，SW 626细胞株可能源自结肠原发性腺癌的卵巢转移。

SW 626

SW 626细胞培养操作

1)复苏SW 626细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)SW 626细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

d、将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)SW 626细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

SW 626可以用于siRNA抑制人卵巢癌SW626细胞CXCR4基因的研究

研究应用RNA干扰技术沉默人卵巢癌SW626细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因后,卵巢癌细胞CXCR4的蛋白表达情况,对卵巢癌细胞增殖活性的影响,推断其与卵巢癌发生、发展、治疗及预后的关系。

方法:根据CXCR4基因编码序列及RNAi寡核苷酸设计原则,设计合成两对针对CXCR4基因的siRNA片段和1对FAM标记的阴性对照siRNA片段,序列经BLAST查询,确定为CXCR4特异性序列,排除与其他基因同源性。实验分为四个组:空白对照组、阴性对照组、实验S1组和实验S2组。用脂质体转染方法转染至卵巢癌SW626细胞中,荧光显微镜观察检测转染效率,采用Western blot检测RNA干扰后卵巢癌SW626细胞CXCR4蛋白的表达情况。利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测转染前后细胞增殖的情况。

结果:1、脂质体转染法转染卵巢癌SW626细胞48小时后,荧光显微镜观察,发现当卵巢癌细胞处对数生长期,培养24h后融合度为90%时进行转染,质粒和脂质体比例为1:3时转染效率最高,发绿色荧光的细胞数可达到70%以上。

2、转染48小时后,用western blot法检测,①实验S1组和S2组与空白对照组和阴性对照组比较,卵巢癌SW626细胞CXCR4/β-actin蛋白表达水平降低,蛋白表达明显受抑制(P<0.05)。②阴性对照组和空白对照组比较:CXCR4/β-actin蛋白表达无显著性差异(P>0.05)。③实验组Sl组和S2组比较:无显著性差异(P>0.05)。

3、转染24h、48h、72h后,MTT法检测细胞增殖情况,结果显示:①实验S1组和S2组与空白对照组和阴性对照组比较,卵巢癌SW626细胞的增殖受到明显抑制,各检测点OD值显著升高(P<0.05)。②空白对照组和阴性对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。③实验组S1和S2组比较差异无显著性意义(P>0.05)。

结论:应用RNA干扰技术能特异性抑制人卵巢癌细胞的CXCR4蛋白的表达和抑制卵巢癌细胞的增殖,证实了应用RNA干扰技术能够抑制CXCR4基因表达的可行性。因此,本实验针对CXCR4基因构建的siRNA能有效的封闭CXCR4的表达,抑制卵巢癌细胞增殖,提示RNA干扰可能用于特异性阻断CXCR4表达,这提示针对CXCR4基因的RNA干扰技术有望成为卵巢癌基因治疗的新靶点

参考文献

[1]The biology of CCR5 and CXCR4.Ghalib Alkhatib.Current Opinion in HIV and AIDS,2009

[2]Chemokines:novel targets for breast cancer metastasis.Simi Ali;;Gwendal Lazennec.Cancer and Metastasis Reviews,2007

[3]MicroRNAs:deviants no longer.Amy E.Pasquinelli.Trends in Genetics,2002

[4]Specific interference with gene expression and gene function mediated by long dsRNA in neural cells.L Gan;;K.E Anton;;B.A Masterson;;V.A.M Vincent;;S Ye;;M Gonzalez-Zulueta.Journal of Neuroscience Methods,2002

[5]汤容.siRNA抑制人卵巢癌SW626细胞CXCR4基因的研究[D].重庆医科大学,2011.