牛磺罗定的应用及含量测定

背景及概述^[1]

近年来，随着抗生素的滥用，几乎所有的常规抗生素都出现了相应的抗药性致病株系，致病菌的耐药性问题已经日益严重地威胁着人们的健康。与抗生素相比，人们证实不论在体外还是临床，牛磺罗定都没有诱使任何微生物耐药性的产生，具有很好的耐药性和抗药性，且副作用小。牛磺罗定是一个有极大应用前景的药物。但是由于牛磺罗定本身没有紫外吸收，牛磺罗定制剂的质量控制，尤其是制剂中牛磺罗定的含量测定一直是个难点。因此，开发一种简便、稳定且适用性好的牛磺罗定含量测定方法具有重要意义。

应用^[2-3]

牛磺罗定是一种牛磺酸类的广谱抗菌药，具有强大的抑菌和抗内毒素作用，临床上广泛用于治疗腹膜炎、预防术后感染等。牛磺罗定在皮肤感染中的用途被皮肤表面的牛磺罗定分解损害。

有研究开发一种牛磺罗定制剂，该制 剂设计成在皮肤渗透过程期间保持牛磺罗定的稳定性。一旦这种专门的牛磺罗定制剂促进 牛磺罗定通过皮肤的角质层、透明层和棘层，专门的牛磺罗定制剂中的牛磺罗定暴露于解剖体且可以发生水解成牛磺罗定的活性部分(即羟甲基)，从而治疗皮肤感染和预防皮肤感染。该专门的牛磺罗定制剂包含可通过皮肤的颗粒层或真皮层中的酶水解的脂溶性赋形剂。这种脂溶性赋形剂包括具有亲脂性侧链和脂肪酸酯的小肽。

制备^[3]

牛磺罗定合成路线如下：

1)牛磺酰氯盐酸盐的制备

在装有通气管、出气管、温度计和机械搅拌的300～600ml四颈瓶中加入半胱胺盐酸盐(25～35g)，200～400ml二氯甲烷及30～50ml无水乙醇，冰水浴(10℃以下)机械搅拌下，通入干燥适度氯气，反应立即开始并放热，有白色粘稠状固体生成，温度保持在50℃以下搅拌，反应1～10h。整个过程用碱液吸收反应过程的HCl气体和氯乙烷气体。反应结束后停止通氯气，得黄色沉淀，抽滤，用二氯甲烷洗涤四次，真空干燥，得白色固体30～50g，熔点152～154℃。

2)牛磺酰叠氮盐酸盐的制备

盛15～45ml水的反应瓶冰水浴冷却至-15～10℃，加入NaN3(2～4g)，搅拌全溶后，分批加入牛磺酰氯盐酸盐(5～9g)溶液略呈粉红色，20分钟后撤去冰水浴，室温继续搅拌20～60分钟。

3)牛磺酰胺盐酸盐的制备

将上述反应液加入到500ml高压反应釜中，加入0.5～1.5g 5％Pd/C，通入氢气，压力为3～7Mpa，室温搅拌2～6h。关掉氢气，倒出反应液，滤去Pd/C，得无色反应液。取少量反应液，加入核磁管中，加入氘代试剂D2O，以1HNMR确定加氢反应的转化率。牛磺酰胺盐酸盐的两种CH2D 1HNMR峰在3.29～3.31和3.40-～3.42ppm处，而反应物牛磺酰叠氮盐酸盐的两种CH2D 1HNMR峰在3.37～3.38和3.82～3.84ppm处。以两种化合物的峰高比例确定第四步加入甲醛的量。

4)牛磺罗定的制备

将上述过滤除去Pd/C的反应液，加入NaHCO3(3～5g)，搅拌至全溶，冰水冷却，搅拌下慢慢滴入甲醛溶液(37％，2～5ml)，30分钟后有乳白色沉淀产生，继续搅拌1h，抽滤，滤饼用冰水洗3～5次。真空干燥，得白色粉状固体2～5g，熔点170～174℃。

化学反应式如下：

含量测定^[1]

对甲苯磺酰氯柱前衍生-反相高效液相色谱紫外检测法测定牛磺罗定及其固体制剂含量，利用牛磺罗定中含有仲胺基的特点，以对甲基苯磺酰氯柱前衍生牛磺罗定，Venusil XBP C18色谱柱分离，在240nm 波长检测，线性范围为0.016～0.160g·L（r＝0.9995），衍生化产在24ｈ内稳定，相对标准偏差为3.8％，回收率为98.5％～101.2％。本方法简便、灵敏度高，且对检设备要求低，适用于工业生产中大批量牛磺罗定原料药及其固体制剂的含量测定。具体步骤如下：

1) 标准品溶液和衍生化试剂溶液的配制　精密称取牛磺罗定，加乙腈制成浓度为4g·L的标准品溶液，分别移取0.4、0.8、1.6、3.2和4.0mL置于10mL的容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，4℃保存，备用。精密称取对甲基苯磺酰氯适量，加乙腈制成浓度为10g·L-1的衍生化试剂溶液，备用。

2) 样品溶液配制　取50mg经研磨后的牛磺罗定片剂粉末，精密称定，置于25mL的容量瓶中，加乙腈适量，超声提取30min，用乙腈定容至刻度，过0.45μm滤膜，4℃保存，备用。

3) 色谱条件Venusil XBP C18

色谱柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（体积比为30∶70），等度洗脱。流速为1.0mL·min-1；检测波长：240nm；柱温：30℃；进样量：5μL。

4)衍生化及预处理　取标准品溶液（或样品溶液）1mL置于10mL的容量瓶中，加入衍生试剂溶液1mL，封口膜封口，震荡30s，置于95℃的水浴锅中，反应5min，冰水浴冷却，加乙腈稀释至刻度，过0.45μm滤膜，备用。反应过程见图1。

主要参考资料

[1]  柱前衍生-反相高效液相色谱测定牛磺罗定及固体制剂含量

[2] CN201680071760.9 牛磺罗定的皮肤渗透制剂

[3] CN200810050662.4 一种牛磺罗定的合成方法及药物制剂