QBC939人胆管癌贴壁细胞系的应用

背景^[1-3]

QBC939人胆管癌贴壁细胞系是一种来源于人类胆管癌的细胞系，它具有高度增殖和侵袭性。这种细胞系在肿瘤学研究中具有重要价值，可以用于研究胆管癌的生长、分化、转移和耐药性等方面。此外，QBC939人胆管癌贴壁细胞系还可以用于药物筛选和基因治疗等研究。

QBC939人胆管癌贴壁细胞系

QBC939人胆管癌贴壁细胞系特点如下：

1.贴壁生长：QBC939人胆管癌贴壁细胞系具有典型的贴壁生长特性，这使得它在培养和实验中具有较高的可操作性。

2.高度异质性：QBC939人胆管癌贴壁细胞系包含多种不同类型的细胞，这些细胞在形态、功能和生物学特性上存在很大差异。

3.高增殖能力：QBC939人胆管癌贴壁细胞系具有较强的增殖能力，这使得它在研究肿瘤生长、侵袭和转移等方面具有重要价值。

4.低分化程度：QBC939人胆管癌贴壁细胞系中的大部分细胞呈现出较低的分化程度，这与胆管癌的临床特征相符。

5.免疫逃逸：QBC939人胆管癌贴壁细胞系中的部分细胞具有较强的免疫逃逸能力，这使得它们在免疫治疗和靶向治疗等研究领域具有潜在应用价值。

6.体外药物敏感性测试结果：QBC939人胆管癌贴壁细胞系对多种化疗药物具有不同程度的敏感性，这为临床治疗提供了参考依据。

QBC939人胆管癌贴壁细胞系复苏培养步骤

1.准备培养基：使用DMEM/F12培养基，添加10%的胎牛血清(FBS),并根据需要添加1-2%的抗生素和生长因子。

2.取样：从临床样本中采集胆管癌组织样本，并进行细胞学或病理学鉴定。

3.制备细胞悬液：将收集到的胆管癌组织样本用胰蛋白酶或胶原蛋白酶消化，然后离心去除细胞碎片和杂质。将上清液转移到新的无菌培养瓶中。

4.调整细胞密度：将细胞悬液稀释至合适的细胞密度，通常为1-5 x 10^6/ml。

5.接种培养基：将稀释后的细胞悬液加入到预先准备好的培养基中，轻轻摇匀。

6.恒温培养：将培养瓶放置于37°C、5%CO2的恒温培养箱中，定期更换培养基，观察细胞生长情况。

7.筛选贴壁细胞：在培养过程中，贴壁细胞会逐渐形成单层，而悬浮细胞则会在培养液中游动。可以通过显微镜观察和计数贴壁细胞的数量来筛选所需的细胞系。

8.扩大培养：当贴壁细胞数量达到所需规模时，可以进行扩大培养，即将细胞传代至含有更多细胞的培养瓶中继续培养。

9.冻存复苏：当需要保存细胞系时，可以将细胞冻存于-80°C以下的冰箱中。需要使用时，将冻存细胞解冻后进行复苏培养即可。

应用^[4-5]

QBC939人胆管癌贴壁细胞系可以用于MicroRNA-133a-5p调控LASP-1蛋白对QBC939胆管癌细胞迁移、侵袭的影响

研究Micro RNA-133(miR-133)在QBC939胆管癌细胞中的表达情况,分析其对QBC939胆管癌细胞株迁移、侵袭的影响,并探寻其中可能存在的分子机制。

方法:QBC939胆管癌细胞于DMEM培养基上培养,使用qRT-PCR(Quantitative real time PCR)检测miR-133三种亚型(miR-133a-5p、miR-133a-3p、miR-133b)的表达情况,选择表达最高的亚型进行后续的实验。通过转染不同试剂构建胆管癌细胞分组:干扰组(转染miR-133a-5p阻断剂),miR-133a-5p mimics组(转染miR-133a-5p模拟物),空白对照组。再次培养后使用qRT-PCR技术检测三组胆管癌细胞内miR-133a-5p的表达。Transwell实验分检各组胆管癌细胞的迁移、侵袭情况;Western blot实验分检各组胆管癌细胞内LASP-1家族蛋白(LIM、SH3-1)的表达情况。使用单因素方差分析统计比较上述结果。

结果:qRT-PCR检测miR-133三种亚型的相对表达:miR-133a-5p(1.07±0.06),miR-133a-3p(0.97±0.11),miR-133b(0.73±0.07),其中miR-133a-5p的相对表达量最高(P<0.05,差异有统计学意义),选择miR-133a-5p继续实验;qRT-PCR检测三组胆管癌细胞miR-133a-5p的相对表达:干扰组(0.70±0.08),miR-133a-5p mimics组(1.43±0.34),空白对照组(0.90±0.17),干扰组miR-133a-5p的相对表达量最低(P<0.05,差异有统计学意义)。Transwell法分检三组胆管癌细胞的迁移、侵袭数量,迁移数量:干扰组(72.0±11.0),miR-133a-5p mimics组(110.3±4.2),空白对照组(106.0±10.4);侵袭数量:干扰组(20.0±3.0),miR-133a-5p mimics组(65.0±2.6),空白对照组(83.7±3.5),干扰组胆管癌细胞的迁移数量最少(P<0.05,差异有统计学意义),侵袭数量最少(P<0.05,差异有统计学意义)。

Western blot法分检三组胆管癌细胞LIM的表达,其灰度值分别为:干扰组(0.85±0.02),miR-133a-5p mimics组(0.30±0.06),空白对照组(0.28±0.05),干扰组胆管癌细胞LIM的表达量最高(P<0.05,差异有统计学意义);Western blot法分检三组胆管癌细胞SH3-1的表达,其灰度值分别为:干扰组(0.71±0.01),miR-133a-5p mimics组(0.98±0.03),空白对照组(0.99±0.01),干扰组胆管癌细胞SH3-1的表达量最低(P<0.05,差异有统计学意义)。

结论:1.在体外miR-133a-5p能调控LASP-1蛋白的表达,敲低miR-133a-5p使胆管癌细胞的LIM表达上调、SH3-1表达下调;2.MiR-133a-5p的敲减能抑制QBC939胆管癌细胞的迁移和侵袭,这可能是通过miR-133a-5p对LASP-1蛋白表达的调控实现的。综上所述,miR-133a-5p可能通过调控LASP-1蛋白的表达进而影响胆管癌细胞的恶性行为,这为以miR-133a-5p为新型分子靶点的抗胆管癌迁移、侵袭治疗提供了广阔的前景,也为胆管癌的早期诊断提供了新的思路。

参考文献

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[5]荣翔.MicroRNA-133a-5p调控LASP-1蛋白对QBC939胆管癌细胞迁移、侵袭的影响[D].青岛大学,2021.