银椴苷的应用和制备

背景及概述^[1]

银椴苷（Tiliroside），又名山奈酚-3-O-β-D-(6’’-O-反式-对羟基桂皮酰基)吡喃葡萄糖苷，是一种黄酮苷类化合物，为黄色针晶，mp.246~248℃，分子式C₃₀H₂₆O₁₃ ，分子量 594.52。研究显示银椴苷在植物中分布较为普遍，在结香花、地桃花、巴西甘薯叶、蜀葵花、白头翁地上部分等植物中均有分离得到，其中结香花中含量最高，高达1.56%。据报道，银椴苷的提取分离方法一般都采用95%乙醇回流提取、浓缩后用水混悬，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等非极性溶剂萃取，萃取部分反复进行硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等多步骤，分离得到银椴苷，这些分离纯化工艺都需经过反复柱层析步骤，存在分离时间长、重现性差、使用大量有毒溶剂、不易工业化等缺点。中国专利采用60-100%甲醇或乙醇溶液浸提或回流提取，提取液水洗后用脂溶性溶剂回流萃取，得到的滤饼重结晶得到产品，用到毒害性有机溶剂，造成溶剂残留，产品质量差。

应用^[1-2]

银椴苷具有较强的抗氧化活性、清除自由基活性和抗炎活性，对补体系统的传统途径显示出非常有潜力的抗补体活性（IC50=5.4×10-5M），其活性甚至比公认的补体系统抑制剂迷迭香酸活性还强。另有文献报道银椴苷及全乙酰化衍生物均具有一定的对白血病癌细胞的毒性作用。银椴苷还具有强的护肝作用。从意大利蜡菊Helichrysum italicum(Roth)G.Don Fil中分得的银椴苷和鼠尾草黄素对由铜诱导的人LDL氧化改变的抑制作用，发现两种成分能够抑制人低密度脂蛋白氧化。

此外，银椴苷具有较好α-葡萄糖苷酶抑制活性的药理活性，2011年从沙棘中分离得到银椴苷，并发现其具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性；2012年从越橘蓝莓中分离得到银椴苷，再次验证其具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性；银椴苷在绿萝花中的含量较高，可以推测银椴苷是治疗糖尿病的主要活性物质。另外，银椴苷还具有广泛的药理活性，2010年发现银椴苷具有可逆抑制3种人肝细胞色素P450酶的活性； 2012年发现银椴苷通过激活脂联素提高肝脏脂肪酸从而改善肥胖所导致的代谢紊乱； 2014年发现银椴苷具有抑制神经炎症的生物活性；相关文献也曾报道银椴苷具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤及保肝活性。

制备^[1-3]

方法1：一种提取纯化银椴苷的方法，该方法包括以下步骤：

1）银椴苷的提取:：取结香花粉碎后加沸水微波提取10-60分钟，其中料液比为1:8-15（kg/L），提取2-4次，过滤，得银椴苷提取液；

2）银椴苷提取液的脱色：将银椴苷提取液加入总液量2%-6%的硅藻土，搅拌，过滤，得银椴苷脱色液；

3）银椴苷的分离：将银椴苷脱色液用大孔吸附树脂柱以0.5-2.0BV/h的流速吸附，然后先用水洗脱，再用体积百分比为20%-50%的乙醇溶液洗脱，采用TLC跟踪检测，收集银椴苷洗脱液；将洗脱液浓缩至无醇味，采用聚酰胺柱层析以甲醇水混合溶液进行梯度洗脱，用TLC快速定性检测，收集相应的银椴苷溶液；

4）结晶：将银椴苷溶液浓缩至小体积，放置结晶，加乙醇水溶液溶解，过滤，重结晶3-5次，得到纯度95%以上的银椴苷晶体。

方法2：从绿萝花提取液中分离和回收银椴苷的步骤如下：

1）将干燥的绿萝花粉碎至粒径1-5mm，置于热回流提取罐中，并加入原料质量8-10倍的乙醇溶液，搅拌混匀，50-60℃下回流提取2-3次，过滤，浓缩滤液所得粗提物用45-55℃热水分散，冷却至室温后用氯仿重复萃取2-3次，氯仿萃取部分备用，剩余水相进一步用正丁醇重复萃取2-3次，减压浓缩正丁醇萃取部分至固液比为1:2-1:4，冷却，硅藻土过滤得滤液A；

2）将滤液A与聚酰胺树脂按30-100g:1L比例混合后，减压抽干正丁醇溶剂后立即装柱，然后用体积比为7:1、5:1、3:1、1:1和0:1的氯仿甲醇混合液依次梯度洗脱，合并氯仿甲醇5:1和3:1的洗脱部分，加水萃取并回收氯仿后，剩余液体浓缩至无醇味，静置10-15h，固液分离，得银椴苷沉淀物A和母液A；

3）将母液A加热至70-80℃，添加助沉淀剂，冷却，静置10-15h，固液分离，得银椴苷沉淀物B；

4）合并银椴苷沉淀物A和银椴苷沉淀物B，重结晶、洗涤、60-70℃减压干燥，即得银椴苷。

方法3：一种檵木中银椴苷的提取纯化方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取檵木药材，粉碎，以8倍量60%乙醇回流提取3次，每次2 小时，合并提取液，回收溶剂，减压干燥；

2）提取物采用大孔树脂进行分离纯化，得水洗脱物、10%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物；

3）70%乙醇洗脱物，甲醇溶解，硅胶拌样后进行减压硅胶柱层析，乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱，共得10个流份。

4）取Fr.A，甲醇溶解，过滤，沉淀反复重结晶得Lor-4，上层溶液，挥干溶剂，再用乙酸乙酯溶解，进行聚酰胺柱层析，乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱，共得8个流份(Fr.A1~8)。取Fr.A6反复ODS柱层析，甲醇/水梯度洗脱，再经柱层析，甲醇/水梯度洗脱，即得到高纯度银椴苷。

方法4：一种从结香中提取分离高纯度银椴苷的新方法，其特征在于包括下述步骤：（1）提取液的制备：将粉碎的结香花采用60-100%的甲醇或乙醇溶液超声提取，提取2-3次，合并提取液备用；（2）膜滤：将上述提取液先用振动式过滤器滤除泥沙等杂质，再通过超滤膜装置除去大分子多糖、鞣质等，得到透过液；（3）大孔树脂柱层析：透过液加活性炭脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入大孔树脂柱吸附，用3-5倍柱体积的30%-80%乙醇水溶液洗脱，收集目标成分，减压浓缩，离心，将清液干燥，得粗提物；（4）高速逆流色谱纯化：以乙酸乙酯-正丁醇-水或正己烷-正丁醇-甲醇-水或正己烷-甲酸乙酯-乙腈-水为溶剂系统，以上相为固定相，下相为流动相，将上述得到的粗提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化，即得到高纯度的银椴苷。

主要参考资料

[1] CN201110187743.0 一种提取纯化银椴苷的方法

[2] CN201510434178.1 一种藏药绿萝花中银椴苷的提取方法

[3] CN201310189414.9 一种檵木中银椴苷的提取纯化方法及检测方法

[4] CN201110187430.5 一种从结香中提取分离高纯度银椴苷的新方法