人胶质瘤细胞的应用

背景^[1-3]

人胶质瘤细胞源自一例2-3级前沿淋巴结星细胞瘤。染色体组型显示89.2%的超三倍体。在Wistar大鼠和裸鼠中接种都能成功。细胞含有神经系统特有的S-100蛋白和星细胞特有的GFA蛋白。

人胶质瘤细胞

人胶质瘤细胞培养步骤

一．人胶质瘤细胞培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022,添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸钠0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）人胶质瘤细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）人胶质瘤细胞冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．人胶质瘤细胞处理：

1）复苏人胶质瘤细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）人胶质瘤细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）人胶质瘤细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

应用^[4][5]

人胶质瘤细胞可以用于异甘草素联合替莫唑胺对缺氧环境中SHG44胶质瘤细胞血管生成拟态的影响及机制研

研究异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)联合替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)对缺氧环境中SHG44胶质瘤细胞的血管生成拟态(Vasculogenicmimicry,VM)和细胞增殖能力及迁移距离的影响并探讨其可能的机制。

方法:使用二氯化钴模拟缺氧环境,分别用空白对照、异甘草素(160umol/L)、替莫唑胺(200umol/L)、异甘草素+替莫唑胺(160umol/L+200umol/L)处理SHG44胶质瘤细胞24h,利用三维培养法来检测SHG44胶质瘤细胞生成血管生成拟态的能力;利用CCK-8法来判断SHG44胶质瘤细胞的增殖能力的改变;利用细胞划痕实验判断SHG44胶质瘤细胞的迁移距离,利用免疫蛋白印迹(western blotting)技术分别测定与血管生成拟态有关的蛋白:基质金属蛋白酶2(Matrixmetallopeptidase-2,MMP-2)、上皮细胞激酶A2(rythropoietin-producinghepatocellular,EphA2)以及血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)含量的改变。

结果:1.部分实验与缺氧环境中的空白对照组、异甘草素、替莫唑胺单药组相比较,异甘草素+替莫唑胺组SHG44胶质瘤细胞的血管生成拟态数量和长度减小更加显著,细胞的增殖能力减小更加显著,细胞的扩散和迁移距离也明显缩短更加显著,差异具有统计学意义

2. 第二部分实验通过Western blotting实验得出:在缺氧环境中,空白对照组、异甘草素组以及替莫唑胺组中胶质瘤细胞的MMP-2、VEGF以及EphA2蛋白的含量无明显减少,差异没有统计学意义(P>0.05)。而在异甘草素+替莫唑胺组中MMP-2、VEGF以及EphA2蛋白的含量有非常显著的下降,其含量差异具有统计学意义(P<0.05)。

结论:1.部分实验ISL+TMZ可抑制缺氧环境中SHG44细胞VM的形成以及细胞的增殖能力和迁移距离。

参考文献

[1]The hypoxia-related signaling pathways of vasculogenic mimicry in tumor treatment.Shuixian Li;;Wen Meng;;Ziwei Guan;;Yuanling Guo;;Xiuzhen Han.Biomedicine&Pharmacotherapy,2016

[2]Role of tenascins in the ECM of gliomas..Brösicke Nicole;;Faissner Andreas.Cell adhesion&migration,2015

[3]A Review:The Pharmacology of Isoliquiritigenin..Peng Fu;;Du Qiaohui;;Peng Cheng;;Wang Neng;;Tang Hailin;;Xie Xiaoming;;Shen Jiangang;;Chen Jianping.Phytotherapy research:PTR,2015

[4]Brain tumor stem cells:Molecular characteristics and their impact on therapy.David L.Schonberg;;Daniel Lubelski;;Tyler E.Miller;;Jeremy N.Rich.Molecular Aspects of Medicine,2014

[5]郝文龙.异甘草素联合替莫唑胺对缺氧环境中SHG44胶质瘤细胞血管生成拟态的影响及机制研究[D].甘肃中医药大学,2021.

参考文献

[1]The hypoxia-related signaling pathways of vasculogenic mimicry in tumor treatment.Shuixian Li;;Wen Meng;;Ziwei Guan;;Yuanling Guo;;Xiuzhen Han.Biomedicine&Pharmacotherapy,2016

[2]Role of tenascins in the ECM of gliomas..Br?sicke Nicole;;Faissner Andreas.Cell adhesion&migration,2015

[3]A Review:The Pharmacology of Isoliquiritigenin..Peng Fu;;Du Qiaohui;;Peng Cheng;;Wang Neng;;Tang Hailin;;Xie Xiaoming;;Shen Jiangang;;Chen Jianping.Phytotherapy research:PTR,2015

[4]Brain tumor stem cells:Molecular characteristics and their impact on therapy.David L.Schonberg;;Daniel Lubelski;;Tyler E.Miller;;Jeremy N.Rich.Molecular Aspects of Medicine,2014

[5]郝文龙.异甘草素联合替莫唑胺对缺氧环境中SHG44胶质瘤细胞血管生成拟态的影响及机制研究[D].甘肃中医药大学,2021.