HLF-a的应用

背景^[1-3]

HLF-a细胞是分离自肺组织的贴壁生长成纤维细胞，主要用于肺部疾病的体外研究模型。

HLF-a细胞

HLF-a细胞培养操作：

1)复苏HLF-a细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)HLF-a细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察HLF-a细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

d、将HLF-a细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)HLF-a细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集HLF-a细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

HLF-a可以用于头颈鳞癌中HLF基因表达与其临床病理的相关性研究

通过TCGA数据库及GEO数据库筛选出与头颈部鳞癌相关的m RNA;探讨HLF基因与头颈部鳞癌患者临床病理特征之间的关系,以及在头颈部鳞癌患者中的临床诊断价值。

方法:1.从TCGA数据库、GEO数据库下载头颈部鳞癌的m RNA表达矩阵,利用R语言及GEO2R在线分析工具对表达矩阵进行差异分析,并结合生存分析网站及文献阅读,筛选出与差异表达基因。

2. 利用相关的生物信息学网站进行HLF泛癌分析,HLF在头颈部鳞癌的组学分析、互作分析、功能分析、差异分析及临床分析。

3. 收集68对头颈部鳞癌组织及癌旁组织,利用显色原位杂交检测HLF m RNA的表达情况;使用免疫组化法检测HLF蛋白、CD4、CD8的表达。

4. 统计学分析HLF m RNA和蛋白的表达与头颈部鳞癌患者临床病理特征的关系;分析HLF与CD4+T细胞、CD8+T细胞浸润的相关性。

结果:1.HLF的泛癌分析:在多种肿瘤中HLF均为低表达。

2. 在头颈部鳞癌中HLF的生物信息学分析:HLF在头颈部鳞癌组织中表达低于癌旁组织;HLF高表达的头颈部鳞癌患者的生存时间长于低表达患者。

3. 显色原位杂交结果显示HLF m RNA在头颈部鳞癌组织中的表达低于癌旁组织(P<0.001),且HLF m RNA表达与肿瘤分化程度相关(P<0.05),但与分期无明显关系。

4. 免疫组化结果显示HLF蛋白在头颈部鳞癌组织中阳性率低于癌旁组织(P<0.01),且与肿瘤分期(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)及分化程度(P<0.05)具有相关性。5.头颈部鳞癌中,HLF的表达与CD4(r=0.618,P<0.001)、CD8(r=0.525,P<0.001)的表达具有正相关关系。

结论:1.HLF m RNA在头颈部鳞癌组织中低表达,HLF m RNA表达与头颈部鳞癌的分化程度存在相关性;HLF蛋白在头颈部鳞癌组织中的表达低于癌旁组织,且与头颈部鳞癌的淋巴结转移、TNM分期及分化程度存在相关性。

2.HLF与CD4+T细胞、CD8+T细胞的浸润相关。

参考文献

[1]The Role of Circadian Genes in the Pathogenesis ofColorectal Cancer..Razi Soofiyani Saiedeh;Ahangari Hossein;Soleimanian Alireza;Babaei Ghader;Ghasemnejad Tohid;Esmaeil Safavi Seyed;Eyvazi Shirin;Tarhriz Vahideh.Gene,2021

[2]Prognostic Value of Eight-Gene Signature in Head and Neck Squamous Carcinoma.Liu Baoling;Su Quanping;Ma Jianhua;Chen Cheng;Wang Lijuan;Che Fengyuan;Heng Xueyuan.Frontiers in Oncology,2021

[3]Circadian clock protein CRY1 prevents paclitaxel‑induced senescence of bladder cancer cells by promoting p53 degradation.Jia Min;Su Bijia;Mo Lijun;Qiu Wen;Ying Jiaxu;Lin Peng;Yang Bingxuan;Li Danying;Wang Dongxia;Xu Lili;Li Hongwei;Zhou Zhongxin;Li Xing;Li Jinlong.Oncology Reports,2021

[4]Global Cancer Statistics 2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries.Sung Hyuna;Ferlay Jacques;Siegel Rebecca L.;Laversanne Mathieu;Soerjomataram Isabelle;Jemal Ahmedin;Bray Freddie.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2021

[5]谢嫣.头颈鳞癌中HLF基因表达与其临床病理的相关性研究[D].南华大学,2022.