人卵巢癌细胞的应用

背景^[1-3]

人卵巢癌细胞由Trempe G和Old LJ在1973年从一位64岁白人女性卵巢腺癌患者的腹腔积液分离得到。该细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物（包括白喉毒素、顺铂和阿霉素）耐受。在裸鼠中成瘤，且形成与卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

人卵巢癌细胞

人卵巢癌细胞培养操作

1）复苏人卵巢癌细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）人卵巢癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）人卵巢癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

1.人卵巢癌细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

人卵巢癌细胞可以用于人参皂苷Rg3抑制人卵巢癌细胞SKOV3侵袭的机制研究

观察人参皂苷Rg3对人卵巢癌细胞SKOV3侵袭作用的影响,并进一步探讨其机制。

方法：以生理盐水为对照组,用浓度为12.5μmol/L(低剂量组)、25μmol/L(中剂量组)和50μmol/L(高剂量组)的人参皂苷Rg3分别处理体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞24h,采用MTT检测SKOV3细胞增殖活性,采用Transwell法检测肿瘤细胞的侵袭能力,RT-PCR和Western blot法检测细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白含量,免疫荧光检测NF-κB的核转位。

结果：12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L的人参皂苷Rg3作用于SKOV3细24h后,其吸光度(OD值)与对照组相比,差异无显著性(P>0.05),对SKOV3细胞的抑制率分别为2.98%、4.47%、7.46%。由此可见12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L人参皂苷Rg3对SKOV3细胞增殖无明显影响。应用Transwell法检测12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L浓度人参皂苷Rg3作用24h后SKOV3细胞的侵袭能力,结果显示对照组有85.44±10.52个细胞穿透基底膜,进入侵袭小室下层;Rg3低剂量组有55.28±9.17个细胞进入侵袭小室下层;Rg3中剂量组有27.69±5.65个细胞进入侵袭小室下层;Rg3高剂量组有6.21±2.46个细胞进入侵袭小室下层。

RT-PCR和Western blot结果显示:12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L浓度人参皂苷Rg3处理24h后VEGF、MMP-2、MMP-9表达较对照组逐渐减少(P<0.05),并且随着Rg3浓度增高,呈现剂量依赖性变化。免疫荧光结果显示:对照组细胞核染色较强,表明NF-κB从胞浆向胞核发生了转移。12.5μmol/L、25μmol/L和50μmol/L浓度人参皂苷Rg3处理24h后,细胞核染色明显下降。

结论：人参皂苷能使人卵巢癌细胞SKOV3的侵袭力下降,其机制与抑制VEGF、MMP-2、MMP-9的表达及抑制NF-κB的转位有关。

参考文献

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[5]蒋丰.人参皂苷Rg3抑制人卵巢癌细胞SKOV3侵袭的机制研究[D].南华大学,2015.