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c-Kit兔单克隆抗体

发布日期:2019/3/14 9:55:50

背景[1-7]

c-Kit Rabbit Monoclonal Antibody(c-Kit兔单克隆抗体)是用c-Kit蛋白对小鼠进行系统免疫再取出脾脏细胞赛选出只分泌单一c-Kit蛋白抗体的B淋巴细胞,再将此B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行杂交。最后制得分泌单一c-Kit蛋白抗体和无限增值的杂交细胞。

肥大/干细胞生长因子受体(SCFR),也称为原癌基因c-Kit或酪氨酸蛋白激酶试剂盒或CD117,是一种受体酪氨酸激酶蛋白,在人类中由KIT基因编码。已发现该基因编码不同同种型的多种转录物变体。KIT最初由德国生物化学家Axel Ullrich于1987年描述为猫肉瘤病毒致癌基因v-kit的细胞同源物。CD117是在造血干细胞以及其他细胞类型的表面上表达的细胞因子受体。这种受体的改变形式可能与某些类型的癌症有关。CD117是一种受体酪氨酸激酶III型,它与干细胞因子(一种导致某些类型细胞生长的物质)结合,也被称为“钢因子”或“c-kit配体”。

当该受体与干细胞因子(SCF)结合时,它形成二聚体这会激活其内在的酪氨酸激酶活性,从而磷酸化并激活信号转导分子,从而在细胞中传播信号。通过CD117的信号传导在细胞存活,增殖和分化中起作用。该基因中的激活突变与胃肠道间质瘤,睾丸精原细胞瘤,肥大细胞病,黑色素瘤,急性髓性白血病相关,而失活突变与遗传缺陷花斑病有关。

CD117的抗体广泛用于免疫组织化学,以帮助区分组织学组织切片中的特定类型的肿瘤。它主要用于诊断GIST,其对CD117呈阳性,但对desmin和S-100等标记物呈阴性,其在平滑肌和神经肿瘤中呈阳性,具有相似的外观。在GIST中,CD117染色通常是细胞质的,沿着细胞膜具有更强的强化。CD117抗体还可用于诊断肥大细胞肿瘤和区分精原细胞瘤与胚胎癌。

研究应用[8]

c-Kit兔单克隆抗体可用于研究胃肠道间质瘤中c-kit和PDGFRA基因突变的检测和临床诊断。

胃肠道间质瘤(GIST)中c-kit基因和PDGFRA基因的突变状况,为进一步的生物靶向治疗提供依据。方法用免疫组织化学EnVision法、聚合酶链反应(PCR)扩增和直接测序的方法,检测165例GISTc-kit基因9、11、13和17号外显子突变以及PDGFRA基因12和18号外显子突变。

结果病理组织学诊断的165例GIST病例中有155例(94%)免疫组织化学显示CD117阳性。在CD117阳性的GIST中,c-kit基因总突变率为76·1%(118/155):分别为11号外显子67·1%(104/155)、9号外显子7·1%(11/155)、13号外显子1·3%(2/155)和17号外显子0·6%(1/155)。绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变。11号外显子的突变位点多集中在5′端的经典热点,其次为3′端的框内串联重复。

后者主要以核分裂象少的老年女性胃部病例多见。9号外显子突变代表一类发生在年轻男性体积较大的小肠病变。13号外显子发现一处新的突变点L641P。PDGFRA基因突变见于50%(5/10)CD117阴性病例,均为18号外显子突变,包括常见的D842V点突变和一个框内843~846处IMHD缺失伴有S847T的新突变。

PDGFRA基因突变多见于发生在后腹膜/网膜的具有高度侵袭危险性的病例。结论中国GIST病例大多数存在c-kit基因和PDGFRA基因的突变,且在基因突变类型和肿瘤原发部位间有非随机的联系。除了发现几个新的突变形式外,国人的GIST似乎和西方国家有些不同的突变特点。靶向治疗需要基因突变分型的启示和指导。

参考文献

[1] Andre C,Hampe A,Lachaume P,Martin E,Wang XP,Manus V,Hu WX,Galibert F(January 1997)."Sequence analysis of two genomic regions containing the KIT and the FMS receptor tyrosine kinase genes".Genomics.39(2):216–26.

[2] "Entrez Gene:KIT v-kit Hardy-Zuckerman 4 feline sarcoma viral oncogene homolog".

[3] National Cancer Institute Dictionary of Cancer Terms.c-kit.Accessed October 13,2014.

[4] Yarden Y,Kuang WJ,Yang-Feng T,Coussens L,Munemitsu S,Dull TJ,Chen E,Schlessinger J,Francke U,Ullrich A(November 1987)."Human proto-oncogene c-kit:a new cell surface receptor tyrosine kinase for an unidentified ligand".EMBO J.6(11):3341–51.PMC 553789.PMID 2448137.

[5] Edling CE,Hallberg B(2007)."c-Kit--a hematopoietic cell essential receptor tyrosine kinase".Int.J.Biochem.Cell Biol.39(11):1995–8.

[6] Leong,Anthony S-Y;Cooper,Kumarason;Leong,F Joel W-M(2003).Manual of Diagnostic Cytology(2 ed.).Greenwich Medical Media,Ltd.pp.149–151.ISBN 978-1-84110-100-2.

[7] Purohit R(2014)."Role of ELA region in auto-activation of mutant KIT receptor:a molecular dynamics simulation insight".Journal of Biomolecular Structure&Dynamics.32(7):1033–46.

[8] 贺慧颖,方伟岗,钟镐镐,李燕,郑杰,杜娟,衡万杰,吴秉铨.165例胃肠道间质瘤中c-kit和PDGFRA基因突变的检测和临床诊断意义[J].中华病理学杂志,2006(05):262-266.

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