人子宫内膜癌细胞的应用

背景^[1-3]

人子宫内膜癌细胞（HEC-1-A）及其亚株HEC-1-B细胞是H·Kuramoto及其同事于1968年从一位ⅠA期子宫内膜癌患者身上分离得到的。PAF可以诱导，HEC-1-A细胞c-fos的表达。

人子宫内膜癌细胞

人子宫内膜癌细胞培养操作

1)复苏人子宫内膜癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。

将含有1 mL人子宫内膜癌细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2)人子宫内膜癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将人子宫内膜癌细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)人子宫内膜癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；

a、收集人子宫内膜癌细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据人子宫内膜癌细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

人子宫内膜癌细胞可以用于miR-373-3p对子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖和迁移的影响

探讨miR-373-3p表达变化对人子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖和迁移生物学特性的影响,并对是否调控LAST2的表达做进一步研究,阐明miR-373-3p促进子宫内膜癌增殖及迁移的可能分子机制,为子宫内膜癌潜方法:构建miR-373-3p mimics和inhibitor慢病毒载体,分别感染至子宫内膜癌HEC-1A细胞中,采用实时荧光定量PCR法检测感染后的HEC-1A细胞中miR-373-3p的表达变化,采用CCK-8法检测miR-373-3p对细胞增殖能力的影响,采用划痕观察miR-373-3p对细胞间接迁移能力的影响,采用Transwell小室实验分析miR-373-3p对细胞直接迁移能力的影响。

通过进一步的生物信息学软件预测miR-373-3p的潜在靶基因,并运用Western Blot实验检测上调或下调miR-373-3p的子宫内膜癌HEC-1A细胞中LAST2的表达,初步验证miR-373-3p的作用靶点。

结果:测序结果证实成功构建人miR-373-3p mimics和inhibitor慢病毒载体。miR-373-3p mimics和inhibitor分别成功上调和下调子宫内膜癌细胞株HEC-1A中miR-373-3p的表达,CCK-8结果显示上调miR-373-3p的表达能够明显促进子宫内膜癌HEC-1A细胞的增殖能力,而沉默miR-373-3p的表达明显抑制HEC-1A细胞增殖能力;划痕和Transwell小室结果表明过表达miR-373-3p明显促进子宫内膜癌HEC-1A细胞迁移能力,而低表达miR-373-3p则降低了HEC-1A细胞的迁移能力。

根据生物信息学软件靶基因预测提示LATS2是miR-373-3p靶基因之一,Western Blot实验表明过表达miR-373-3p明显抑制了子宫内膜癌HEC-1A细胞中LATS2蛋白表达,而低表达miR-373-3p明显增高HEC-1A细胞LATS2蛋白表达。

结论:miR-373-3p在子宫内膜癌HEC-1A细胞中可能发挥癌基因作用,过表达miR-373-3p能够促进HEC-1A细胞的增殖和迁移能力,而低表达miR-373-3p则抑制HEC-1A细胞的增殖和迁移能力。miR-373-3p可能通过调控LATS2表达影响子宫内膜癌的发生发展,是一个治疗子宫内膜癌的潜在靶点。

参考文献

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[5]李美仪.miR-373-3p对子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖和迁移的影响[D].广西医科大学,2018.