MAP1b(MAP5)抗体(小鼠单抗)

背景^[1-5]

MAP1b(MAP5)抗体(小鼠单抗)是用MAP1b蛋白对小鼠进行系统免疫再取出脾脏细胞赛选出只分泌单一MAP1b蛋白的B淋巴细胞，再将此B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行杂交。最后制得分泌单一MAP1b蛋白和无限增值的杂交细胞。MAP1b也称MAP5，MAPIX或MAP1.2，是脑发育过程中微管(microtubule)的主要结合蛋白。MAP1b的表达水平在脑的发育过程中发生改变。MAP1b在新生大鼠脑中的表达水平很高，但在成年大鼠脑中的表达水平要低10倍左右。

随着MAP1b水平的下调，神经系统逐渐发育成熟。对于培养的PC12，NGF刺激后MAP1b的蛋白水平可以升高10倍左右。这种MAP1b的上调和NGF诱导的neurite outgrowth密切相关。MAP1b是轴突形成过程中最早出现在轴突中的MAP，当新生的轴突刚从细胞体上形成时MAP1b就可以被检测到。由于MAP1b的蛋白水平和PC12或SNKH等细胞的分化程度直接相关，常用Western检测MAP1b水平的方法来更加便捷和准确地研究PC12或SNKH等细胞的分化情况。

MAP1b抗体也常被用于免疫染色来观察neurite outgrowth。微管相关蛋白家族被认为参与微管组装，这是神经发生的必要步骤。该基因的产物是前体多肽，其可能经历蛋白水解加工以产生最终的MAP1B重链和LC1轻链。小鼠微管相关蛋白1B基因的基因敲除研究表明在神经系统的发育和功能中起重要作用。已经描述了两种可变剪接的转录物变体。

微管相关蛋白1B(microtubule associated protein 1B,MAP1B)是神经细胞骨架蛋白的重要成分,广泛表达于中枢及外周神经系统,分布于神经元胞体、轴突、树突和突触部位,可以调节微管动力学状态并促进微管聚合成束,对轴突导向、延长及突触发育起重要作用。

研究应用^[5][6][7]

1.用于研究微管相关蛋白1B在FMR1基因敲除小鼠睾丸间质细胞中的表达

对不同周龄的Fmr1基因敲除和野生型雄性小鼠睾丸组织微管相关蛋白1B的表达进行分析比较,探讨Fmr1基因敲除小鼠的睾丸间质细胞微管相关蛋白1B表达的差异。方法采用不同周龄(4、6、8、10周)的FMR1基因敲除型(KO)和野生型(WT)各6只,先采用聚合酶链式反应(PCR)技术对KO小鼠和WT小鼠进行基因型鉴定,之后所有小鼠麻醉取睾丸组织、石蜡包埋切片进行HE染色对比观察Fmr1小鼠睾丸组织的形态,最后用免疫组织化学染色技术对KO小鼠和WT小鼠睾丸微管相关蛋白1B的表达进行检测并作对比分析。

结果微管相关蛋白1B在4～10周小鼠睾丸间质细胞阳性表达,8、10周为强阳性表达,且KO小鼠在睾丸的阳性表达均高于WT小鼠。结论微管相关蛋白1B在同周龄FMR1基因敲除小鼠睾丸间质细胞的表达均显著高于WT小鼠,提示微管相关蛋白1B可能参与脆性X综合征巨睾症的发病过程。

2.用于研究微管相关蛋白1B和突触素Ⅰ在FMR1基因敲除小鼠脑组织中的表达及相关性

方法:将小鼠分为成年基因敲除(KO)组、成年野生(WT)组、新生KO组、新生WT组4组,每组10只,用免疫组化法检测MAP1B及突触素Ⅰ(synapsinⅠ,SYN)的分布和表达。用图像分析仪分别对大脑皮质、海马及小脑DAB显色的平均光密度值(MOD)进行采集,分析不同基因型及不同年龄组MAP1B与SYN在各脑区MOD值的差异,以及二者之间的相关性。

结果:成年KO组及新生KO组小鼠各个脑区中MAP1B与SYN的改变均无明显相关(P>0.05)。结论:FMR1基因敲除小鼠MAP1B与SYN的表达之间并无显著相关关系,提示MAP1B在脆性X综合征的发病机制中不是通过调节突触数量的改变起作用的。

3.用于研究神经元分化相关蛋白Dok5和MAP1B的功能研究

MAP1B是神经系统发育过程中最先表达的微管相关蛋白，通过调节微管动力学行为在神经发育和神经元分化过程中发挥重要作用。免疫共沉淀试验证明Dok5在体内能与磷酸化的LC1相互作用。

用免疫荧光对Dok5和LC1的细胞内定位研究发现Dok5主要在质膜上呈不连续分布，其与LC1在共定位于细胞的质膜附近。MAP1B与Dok5的相互作用对阐释Dok5在神经系统中的功能提供了新的线索。同时我们还初步尝试了用串联亲和纯化方法寻找与Dok5相互作用的蛋白复合体以获得更多的功能信息，为全面阐释Dok5在神经元分化中的作用奠定基础。

参考文献

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