人乳腺导管癌细胞的应用

背景^[1-3]

人乳腺导管癌细胞该细胞于1992年从一位50岁的白人女性乳腺导管癌组织中分离建立，该患者曾有平滑肌肉瘤的病史，其母亲死于乳腺癌；该细胞癌基因her2/neu-，p53+；上皮细胞特异性标志物EGP2（上皮糖蛋白2）和CK19阳性，ER和PR阴性。

人乳腺导管癌细胞

人乳腺导管癌细胞培养步骤：

一．人乳腺导管癌细胞培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸钠0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）人乳腺导管癌细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）人乳腺导管癌细胞冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．人乳腺导管癌细胞处理：

1）复苏人乳腺导管癌细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）人乳腺导管癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于人乳腺导管癌细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗人乳腺导管癌细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将人乳腺导管癌细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）人乳腺导管癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将人乳腺导管癌细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。

应用^[4][5]

人乳腺导管癌细胞可以用于B-降胆甾醇衍生物的合成及抗肿瘤活性研究

在前期工作的基础上,以胆固醇为原料,进行母体结构修饰和改造,并引入一些杂原子,如N、O原子,合成得到一系列胆固醇衍生物,采用1H NMR,13C NMR,HREIMS,IR等现代分析技术对合成物进行结构表征,并将所得化合物进行体外抗肿瘤活性测试。

1:参考胆固醇在人体中的生物降解程序,以胆固醇为原料,经过臭氧氧化、环化缩合、还原及氧化反应,分别得到6个B-环断环胆固醇和B-环缩环胆固醇(B-降胆固醇)及它们的还原产物及氧化产物,然后对这些胆固醇的降解产物分别进行体外抗肿瘤活性筛选研究。在此研究的基础上,对B-降胆固醇的3-位羟基进行酯化修饰,形成不同结构的酯基,同时将6-位醛基氧化成为羧基或者还原成醇,最后合成得到一系列3-酯基-B-降胆甾-6-羧酸和3-酯基-B-降胆甾-6-醇。此部分工作共合成得到28个化合物,其中包括12个文献未见报道的中间产物和14个文献未见报道的目标产物,所有合成物都经过了IR、NMR和HRMS的结构表征。同时,采用卵巢癌细胞(SKOV3)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人乳腺导管癌细胞(T47D)、人肺癌细胞(H460)和人肾上皮细胞(HEK293T)作为筛选对象,对合成物进行了体外抑制肿瘤细胞生长增殖活性测试。

2:在部分工作的基础上,保留对B-降胆固醇3-位羟基的酯化修饰,但将B-降胆固醇的6-位醛基进一步转换成为在前期工作中证实具有显著抗肿瘤活性的缩氨硫脲药效团,由此得到一系列的3-酯基-B-降胆甾缩氨硫脲化合物。另外,经过类似的合成方法,在获得B-降胆甾醇母体后,将3-位羟基氧化为羰基,然后6-位醛基转换成为4-甲基硫代缩氨基脲,3-位羰基进一步肟化或转换成为其它含N的肟醚官能团,合成得到5个具有不同3-取代官能团的B-降胆甾-4′-甲基硫代缩氨基脲衍生物。

工作共合成得到25个化合物,其中包括8个文献未见报道的中间产物和12个文献未见报道的目标产物。所有合成物都经过了IR、NMR和HRMS的结构表征。同时,采用卵巢癌细胞(SKOV3)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人乳腺导管癌细胞(T47D)和人肾上皮细胞(HEK293T)作为筛选对象,对合成物进行了体外抑制肿瘤细胞生长增殖活性测试。

3:同样以部分中的工作为基础,将胆固醇降解所得到的具有较好体外抗肿瘤活性的B-降胆甾-6-羧酸中的6-羧基进行酰胺化,在化合物的6-位引入不同的6-位酰胺官能团,合成得到8个B-降胆甾-6-酰胺衍生物,所有目标产物都是文献中未曾报道的化合物。所有合成物都经过了IR、NMR和HRMS的结构表征。同时,采用卵巢癌细胞(SKOV3)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人乳腺导管癌细胞(T47D)和人肾上皮细胞(HEK293T)作为筛选对象,对合成物进行了体外抑制肿瘤细胞生长增殖活性测试。

参考文献

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