Mag-Beads His-Tag蛋白纯化磁珠的制备

背景^[1]

作为一种新型纳米材料，磁珠能用于检测毒素、病毒、细菌等，也可用于分离特定生物分子。磁性分离技术是以磁性微粒为载体，在外加磁场的定向控制下，利用磁性微粒表面的配体和受体间的特异性亲和作用，可从复杂的原始生物体系中直接分离出目标生物分子，具有简单方便和高选择性的双重优势，为生物分子的快速分离和富集提供一种强有力的手段。

制备^[2]

参考 Liu 等的 NHS/EDC 化学偶联方法，将 Tm 的单克隆抗体 2A7H6与磁珠化学偶联。

首先，分别取 A 和 B 两种磁珠 1 mg，用 50 mM MEST 溶液（含 0.05% Tween-20，pH 5.2）洗涤 3 次，分别加入 1.6 μg 的 EDC 和 NHS，混合均匀后室温反应 30 min。

然后用 MEST 洗涤磁珠 3 次，再用 10 m M 硼酸盐缓冲液（简称 BST，含 0.05% Tween-20，pH 9.0）洗涤 2 次，分别加入 25、50、75、100和 125 μg 的 2A7H6抗体，室温混合反应 3 h。反应结束后收集上清液用于偶联量测定。用 BST 洗涤3 次后，加入 500 μL 封闭液（含 1% BSA 的 BST 溶液），室温反应 30 min。

最后，将免疫磁珠重悬在 500 μL 保存液（含 0.05% NaN3和 0.1% BSA 的 BST 溶液）中，4 ℃冷藏备用。

Mag-Beads His-Tag蛋白纯化磁珠

首先，取制备好的免疫磁珠，用 500 μL 20 mM PBS 溶液（pH 7.2）洗涤 3 次后，加入 1 mg Tm富集液反应 30 min，然后回收上清液用于蛋白定量。接着用 500 μL PBS 洗涤磁珠 2 次，加入 500 μL 20 mM 甘氨酸-HCl 缓冲液（pH 2.7）于垂直混合器上反应，洗脱 15 min。在收集洗脱液的离心管中提前加入适量的 Tris-HCl 缓冲液（pH 9.0），使洗脱液 pH 保持中性。洗脱后的免疫磁珠用 MEST 缓冲液洗涤 4 次后重悬在 500 μL 保存液中，4 ℃冷藏保存。

参考文献

[1] 不同磁珠对过敏原蛋白纯化效果的比较研究 .李文娇

[2] Liu  Y,  Zhang  Z,  Wang  Y,  et  al.  A  highly  sensitive  and  flexible  magnetic  nanoprobe  labeled  immunochromatographic  assay

  platform for pathogen Vibrio parahaemolyticus[J].