IgG抗体纯化树脂的介绍

概述^[1]

 IgG纯化树脂是采用平均粒径为45-165 μm的4%高度交联琼脂糖凝胶经过溴化氰活化后，再将人的IgG共价连接而成，它可以 用来纯化和抗体结合的各种蛋白，例如Protein A、Protein G和分泌型表达载体pEZZ18所表达的含有两个人工合成的Z抗体结合区的融合蛋白，提供的该IgG纯化树脂为悬浮液，纯化树脂含量为50%。

特点^[1]

 1. 配体为人IgG，载量6-10 mg人IgG /mL纯化树脂。

 2. 结合量为大于2 mg Protein A/mL纯化树脂。

 3. pH范围为3-10，保存温度2-8°C，含有20%的乙醇。

 4. 刚性强，流速快(300 cm/h、100 kpa)。

5. 基团脱落少，结合特异性强，载量高，寿命长。

运输和保存条件^[1]

常温运输，4°C保存，保质期两年，不可冻存。

实验前准备^[1]

推荐使用的缓冲液:

结合液：Tris-saline Tween 20 (TST): 50 mM Tris buffer、 pH 7.6、150 mM NaCl and 0.05% Tween 20。

洗脱液：0.5 M CHCOOH (HAc) 用 CHCOONH4 调节 pH 到 3.4，或 0.1 M Glycine-HCl pH 3.0。 洗涤液：5 mM NH4Ac， pH 5.0

 操作步骤

1. 用至少5倍柱床体积的TST清洗IgG纯化树脂，以便完全去除残留的含有乙醇的保存液。 2. 用至少2倍柱床体积的以下溶液依次平衡IgG纯化树脂一次，1) 0.5 M HAc， pH 3.4；2) TST； 3) 0.5 M HAc，pH 3.4； 最后再用2倍柱床体积的TST平衡IgG纯化树脂两次。

3. 将所要纯化的含有目的蛋白的清澈的细菌裂解液、细胞上清或培养基的pH调整到中性，再将样品加入含有IgG纯化树脂 纯化柱中。

4. 静止5 min后，再用5倍柱床体积的TST清洗IgG，纯化树脂两次；再用2倍柱床体积的5 mM NH4Ac pH 5.0清洗两次。

5. 用0.5 M HAc pH 3.4或者0.1 M Glycine-HCl pH 3.0洗脱收集目的蛋白，同时1 M的Tris-HCl（pH 9.0左右）调节pH到中 性。 6. 采用BCA法（C503021）或（C503061）定量确定蛋白浓度,采用SDS-PAGE确定蛋白的大致纯度。

参考文献

[1]IgG抗体纯化树脂产品介绍