人甲状腺鳞癌细胞的应用

背景^[1-3]

人甲状腺鳞癌细胞源于一位59岁的白人男性患者的甲状腺鳞癌组织；人甲状腺鳞癌细胞在裸鼠中成瘤(产生Ⅲ级恶性纺锤状巨细胞瘤)。

人甲状腺鳞癌细胞

人甲状腺鳞癌细胞培养步骤：

人甲状腺鳞癌细胞培养基及培养冻存条件准备：

L-15培养基，90%；优质胎牛血清，10%。培养条件：气相：空气，100%。温度：37摄氏度。

冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

人甲状腺鳞癌细胞处理：

复苏人甲状腺鳞癌细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

人甲状腺鳞癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

2.待细胞长至80-90%时，需要对其进行传代，推荐传代比例为1:3至1:5；

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为消化时间，记录消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心5min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

3）人甲状腺鳞癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

应用^[4][5]

人甲状腺鳞癌细胞可以用于线粒体分裂在甲状腺鳞癌细胞SW579细胞增殖、凋亡以及侵袭中的作用

研究线粒体动力学蛋白中融合蛋白2(Mitofusin 2,Mfn2)和动力蛋白1(Dynamin-related protein1,Drp1)在甲状腺鳞癌SW579细胞中的表达和线粒体分裂抑制剂-1(Mitochondrial division inhibitor 1,Mdivi-1)对SW579细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。

方法采用RT-PCR检测Mfn2和Drp1 mRNA,Western blot检测Mfn2和Drp1蛋白在Nthy-ori 3-1和SW579两种细胞中的表达；然后将SW579分为对照组(DMSO,0.1%)和Mdivi-1低、中、高剂量组(浓度分别为15、30、45μmol/L),培养16 h,采用MTT法检测细胞增殖能力的变化,用荧光分光光度计检测各组线粒体膜电位的变化,用RT-PCR检测各组Caspase-3 mRNA的变化,Western blot检测各组Caspase-3蛋白的变化,用Transwell小室侵袭实验检测各组侵袭能力的变化。

结果1、与Nthy-ori 3-1细胞系相比,SW579细胞系中Mfn2 mRNA和蛋白表达明显降低,Drp1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01)。

2、与对照组相比,Mdivi-1低、中、高剂量组中SW579中细胞存活率,线粒体膜电位以及侵袭能力均明显降低(P<0.01)。3、与对照组相比,Mdivi-1低、中、高剂量组中SW579细胞中Caspase-3的mRNA及蛋白表达均明显增加(P<0.01)。

结论1、甲状腺鳞癌SW579细胞中存在明显的线粒体动力学异常。

2、Mdivi-1可以浓度依赖性地抑制甲状腺癌细胞的增殖和侵袭,诱导其凋亡。

参考文献

[1]The role of dynamin-related protein 1 in cancer growth:a promising therapeutic target?[J].Wei Qian;;Jingnan Wang;;Bennett Van Houten.Expert Opinion on Therapeutic Targets,2013(9)

[2]Prim?res Plattenepithelkarzinom der Schilddrüse[J].H.Kleinhans;;K.W.Schmid;;T.Verse.HNO,2013(7)

[3]A selective inhibitor of Drp1,mdivi-1,acts against cerebral ischemia/reperfusion injury via an anti-apoptotic pathway in rats[J].Ning Zhang;;Shilei Wang;;Yu Li;;Lei Che;;Qin Zhao.Neuroscience Letters,2013

[4]Mitofusin 2 mutations affect mitochondrial function by mitochondrial DNA depletion[J].Stefan Vielhaber;;Grazyna Debska-Vielhaber;;Viktoriya Peeva;;Susanne Schoeler;;Alexei P.Kudin;;Irina Minin;;Stefanie Schreiber;;Reinhard Dengler;;Katja Kollewe;;Werner Zuschratter;;Cornelia Kornblum;;Gábor Zsurka;;Wolfram S.Kunz.Acta Neuropathologica,2013(2)

[5]申菲菲.线粒体分裂在甲状腺鳞癌细胞SW579细胞增殖、凋亡以及侵袭中的作用[D].辽宁医学院,2015.