化学修饰热启动酶防污染Mix的操作流程

概述^[1]

此试剂提供了进行简便、灵敏和防污染的 PCR 检测系统。 核心试剂包含了化学修饰热启动酶（Hotstart HiTaq DNA polymerase）、UDG 酶（Uracil-DNA Glycosylase）、MgCl2 溶液、经过优化的缓冲液和优化比例的 dUTP/dNTP Mix， 使用者只需加入适量的引物和探针或荧光染料，即可进行荧 光 PCR 检测。在 PCR 反应前加入 UDG 可降解含有尿嘧啶 的 PCR 产物，而对不含尿嘧啶的模板无任何影响。在反应 中 Hotstart HiTaq DNA polymerase 的加入使得反应具有极 强的特异性和高度灵敏度。

UDG 的作用原理：在 PCR 反应前 50°C、2 min 反应中，UDG 酶可水解 PCR 反应液中含有尿嘧啶的 PCR 产物的尿 嘧啶碱基和糖磷酸骨架的 N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。随后 进行 95°C、10 min 热处理，在 UDG 酶失活的同时进一步 对磷酸骨架水解，从而消除含有尿嘧啶的 PCR 产物的污染。 UDG 酶可以作用于单链或双链 DNA，对 RNA 无活性。

组成成分

操作流程

 1. PCR 反应体系的设置：

1) 溶解并混匀 PCR 反应所需的各种溶液。并放置于冰浴 上或冰盒内。建议反应 PCR 液体分装使用，避免反复冻融。

2) 参考下表设置的反应,建议 PCR 反应体系的配置在冰浴或在冰盒上进行。

3) 用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀，室温离心 数秒，使液体积聚于管底。

4) 各设置好的 PCR 反应管置于 PCR 仪上，开始 PCR 反 应。

2. PCR 反应参数的设置：

保存方法

 -15°C 到 -25°C 保存，有效期见包装。

参考文献

化学修饰热启动酶防污染Mix产品说明书