日本蟾蜍毒苷元的应用

背景及概述^[1][2]

日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)(CS-6)，属于中药蟾酥中所含有的蟾蜍甾烯内酯类化合物。前期研究表明CS-6在抑制肿瘤细胞的生长和炎症反应中具有良好效果。但目前CS-6对血管新生的影响及其潜在的分子机制还了解甚少。

应用^[1-3]

有实验主要探讨CS-6抑制VEGF诱导人脐静脉HUVECs细胞的增殖、管形成能力以及血管生成的分子机制。实验采用MTT法检测不同浓度日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)(CS-6)对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响；采用划痕实验、Transwell侵袭实验和激光共聚焦免疫荧光方法检测CS-6对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞迁移和侵袭的影响。此外，通过管形成、球状体成芽、小鼠主动脉环等体外实验研究CS-6对VEGF刺激后血管新生的影响；采用基质胶栓实验评估CS-6对VEGF刺激的小鼠体内血管新生的影响。为寻找CS-6的作用靶点，本实验采用分子对接法，在体外模拟CS-6与VEGFR-2的相互作用。利用Western blot、免疫荧光、免疫共沉淀等手段来探索CS-6抑制血管生成的潜在机制。结果显示日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)(CS-6)在体外实验中显著抑制VEGF诱导的HUVECs细胞增殖、迁移、侵袭和管形成，并且在C57/BL6小鼠体内抑制基质胶栓中血管的形成。实验采用计算机分子对接模拟以及免疫共沉淀的方法，发现CS-6可以结合到VEGFR-2的ATP结合位点上，阻断ATP与VEGFR-2的结合而不影响VEGF与VEGFR-2的结合，从而降低VEGFR-2的磷酸化水平，抑制其生理活性，继而抑制VEGFR-2所介导的下游信号通路；同时，Western blot检测表明CS-6可以显著抑制由VEGF诱导的VEGFR-2的磷酸化；此外，通过si RNA敲低VEGFR-2，进一步验证了CS-6可以通过抑制VEGFR-2信号通路激活，发挥抑制血管新生的作用。结论：本研究发现日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)(CS-6)通过抑制VEGFR-2信号通路的激活而产生抑制血管生成的作用。研究表明，日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)在治疗与血管新生相关疾病方面具有潜在的应用价值。

此外，有实验探讨CS-6对肺癌A549细胞的毒性作用以及抑制细胞生长作用的分子机制。在实验中，采用MTT法检测不同浓度日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)(CS-6)处理人肺癌细胞A549、H1299和H322后的细胞活力；同时也检测CS-6对人正常肺组织细胞HLF细胞活力的影响。通过细胞迁移实验，细胞集落形成实验和细胞凋亡检测，研究CS-6对非小细胞肺癌抑制作用的生物学功能。在分子机制研究中，运用激光共聚焦免疫荧光技术，DNA-蛋白质相互结合Pulldown分析方法以及染色质免疫共沉淀方法，研究CS-6作用于A549细胞，对其转录因子NF-κB p50/p65的核定位和转移及其与转录共活化子p300的相互作用，以及它们结合到COX-2启动子区域变化的影响。为了寻找CS-6的作用靶点，本实验采用分子对接方法，在体外模拟CS-6与IKKβ的相互作用。利用异种荷瘤小鼠实验，研究CS-6体内抑制肿瘤生长的活性及分子机制。采用Western blot方法检测经CS-6处理后，细胞蛋白质水平的变化。结果显示日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)(CS-6)能够显著抑制非小细胞肺癌中COX-2的表达，其机制为CS-6作用于IKKβ与ATP结合位点，抑制其磷酸化，从而抑制NF-κB结合到COX-2的启动子区以及p300的募集，影响转录和翻译过程。此外，CS-6还能通过激活细胞色素C和caspase依赖的细胞凋亡途径诱导肿瘤细胞的凋亡。在体内实验中，CS-6能够显著抑制异种移植裸小鼠肿瘤组织中COX-2和磷酸化NF-κB p65的表达水平，以及降低荷瘤小鼠肿瘤的大小和重量。结论：本研究发现日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)(CS-6)能够显著抑制非小细胞肺癌细胞中COX-2的表达，其作用机制为抑制IKK?/NF-κB信号通路。研究表明，日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)(CS-6)具有潜在的应用价值，并可能被设计开发为治疗由COX-2介导的疾病的新药物，如肺癌。 

另外，有研究开发了一种含有日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)的治疗心血管疾病的药物组合物。尤其涉及一种含有能吸收进入血液的药效成分群的治疗心血管疾病的药物组合物。所述的药效成分群包括：日本蟾蜍毒苷元(日蟾蜍它灵)，人参皂苷Re，人参皂苷Ra1，1β-羟基蟾毒灵，人参皂苷Rb1，脂蟾毒精醇，人参皂苷Rc，人参皂苷Rb2，人参皂苷，人参皂苷Rd，蟾毒灵，胆酸，猪去氧胆酸，华蟾酥毒基，鹅去氧胆酸和去氧胆酸。本发明药物具有明确的体内作用靶点，和多成分多靶点的作用特点及优势。对急性心肌缺血损伤具有良好的保护作用，可缩小心肌梗死面积，降低血清中乳酸脱氢酶和肌酸激酶的含量。

主要参考资料

[1]日蟾蜍它灵抑制肺癌细胞中COX-2表达机制的研究

[2]日蟾蜍它灵对VEGF诱导血管生成影响的研究

[3]CN200910056638.6一种治疗心血管疾病的药物组合物及其制备方法