TMS1兔单克隆抗体

背景^[1][2][3][4]

TMS1 Rabbit Monoclonal Antibody（TMS1兔单克隆抗体）是将TMS1蛋白注入兔体内进行免疫程序，进行系统免疫后再抽取兔血中的TMS1抗体蛋白。TMS1通过活化caspase-9诱导细胞凋亡，抑制人乳腺癌细胞的存活。TMS1在人中由编码PYCARD 基因。这是主要定位于细胞核的单核细胞和巨噬细胞。然而，在病原体感染的情况下，它迅速重新定位于细胞质，核周空间，内质网和线粒体，并且它是激活炎性 体的关键衔接蛋白。

该基因编码衔接蛋白，其由两个蛋白质 - 蛋白质相互作用结构域组成：N-末端 PYRIN-PAAD-DAPIN结构域（PYD）和C-末端半胱天冬酶募集结构域（CARD）。PYD和CARD结构域是六螺旋束死亡结构域折叠超家族的成员，其通过激活半胱天冬酶介导炎症和凋亡信号传导途径中的大信号传导复合物的组装。

在正常细胞中，这种蛋白质定位于细胞质 ; 然而在经历细胞凋亡的细胞中，它在核周边附近形成球状聚集体。PYCARD可以以四种不同的同种型发生。同种型1，通常称为经典PYCARD，同种型2是活化同种型。它们与核苷酸寡聚化结构域样受体（NLR）和半胱天冬酶-1共定位。与同种型1不同，同种型2参与直接IL-1β加工调节。同种型3是抑制性同种型，因此它仅与半胱天冬酶-1共定位，但不与NLR共定位。同种型4不能在NLR信号传导中充当衔接蛋白，其作用仍然难以捉摸。

临床应用^[5][6]

TMS1兔单克隆抗体可用于凋亡相关斑点样蛋白在人牙髓组织中表达的免疫组化研究。凋亡相关斑点样蛋白TMS1是炎症传感器的重要衔接蛋白。TMS1由两个区域构成:它由N-末端Pyrin结构域(PYD)和C-末端结构域(CARD)组成,通过Pyrin结构域与上游炎性传感器相互作用,这种相互作用触发TMS1聚集成高度交联的大分子集合体,即TMS1-speck(TMS1斑点),TMS1斑点是pro-Caspase-1(半胱天冬酶-1前体)活化和募集的必要平台,使用它的CARD结构域,使pro-Caspase-1的单体靠近,从而启动pro-Caspase-1的自我裂解和激活,活化的Caspase-1(半胱天冬酶-1)通过蛋白水解加工和释放许多蛋白质,包括IL-1β和IL-18等重要炎症因子,从而导致炎症的产生。

同时,在感染性疾病的存在下,被微生物病原体强制注射的细胞对宿主是有害的,当巨噬细胞和树突状细胞以这种方式受到损害时,可导致细胞发生Pyroptosis(焦亡)裂解(Pyroptosis发生于Caspase-1被各种炎症体激活后触发并导致受影响细胞的裂解,本质上是一种细胞程序上的炎性死亡)。炎症激活导致中性粒细胞和单核细胞快速募集到危险部位,这对于限制感染扩散和组织损伤后修复十分重要。

牙髓炎是牙髓病中最主要的疾病,而细菌感染又是牙髓炎众多致病因素中最主要的病因。牙髓组织一旦受到细菌的感染,固有免疫系统就会起作用,通过模式识别受体(PRRs)识别病原体,进而激活下游信号转导通路,引起一系列炎症反应。而白介素-1(IL-1)细胞因子家族成员IL-1β和IL-18是这一过程的重要参与者,同时TMS1又作为炎症衔接蛋白,对于IL-1β和IL-18的加工和释放又起到重要作用,但目前TMS1与炎症牙髓组织之间的关系尚未明确,未见报道。因此,本实验就TMS1在人牙髓组织炎症过程中的表达和作用进行初步探讨。

实验目的:采用免疫组织化学的方法检测TMS1分别在人牙髓组织正常状态下、急性炎症和慢性炎症状态下的表达及定位情况,探讨TMS1在急慢性牙髓炎发生发展中的可能机制。

实验方法:根据选取标准从临床收集新鲜的牙髓组织经4%多聚甲醛固定、石蜡包埋、切片,进行HE染色,并根据镜下组织病理状态将标本分为正常牙髓组、急性炎症组和慢性炎症组三组。用免疫组织化学的方法进行染色,在光学显微镜下观察各组标本阳性染色情况,查出阳性细胞数,并计算出阳性细胞表达率,采用spss23.0统计分析软件进行分析,数据采用单因素方差分析,并通过Q检验进行两两比较,当p<0.05时,认为有统计学意义。

实验结果:HE染色结果:正常牙髓组可见大量的成牙本质细胞和成纤维细胞,毛细血管、胶原纤维等,未见明显的炎症细胞;炎症组可见牙髓血管扩张充血、通透性增加,急性炎症组以中性粒细胞浸润为主,慢性炎症组以淋巴细胞浸润为主等。

免疫组化染色结果:正常牙髓组未观察到TMS1阳性表达;急性炎症组镜下观察可见中性粒细胞、单核/巨噬细胞、淋巴细胞胞浆阳性表达;慢性炎症组镜下观察可见淋巴细胞、单核/巨噬细胞、浆细胞胞浆阳性表达。结论:TMS1在人正常牙髓组织中未见表达,在急慢性炎症牙髓组织中有表达,TMS1作为炎症传感器的重要衔接蛋白参与了牙髓炎的发生发展。

参考文献

[1] GRCh38:Ensembl release 89:ENSG00000103490-Ensembl,May 2017

[2] GRCm38:Ensembl release 89:ENSMUSG00000030793-Ensembl,May 2017

[3] "Entrez Gene:PYCARD PYD and CARD domain containing".Retrieved 18 September 2010.

[4] Dunn,JH;Fujita,M(2015)."PYCARD(PYD and CARD domain containing)".Atlas of Genetics and Cytogenetics in Oncology and Haematology(4).doi:10.4267/2042/56440.ISSN 1768-3262.

[5] Alba,Eva de(2009-11-20)."Structure and Interdomain Dynamics of Apoptosis-associated Speck-like Protein Containing a CARD(ASC)".Journal of Biological Chemistry.284(47):32932–32941.doi:10.1074/jbc.M109.024273.ISSN 0021-9258.PMC 2781708.PMID 19759015.

[6] 凋亡相关斑点样蛋白ASC在人牙髓组织中表达的免疫组化研究[D].武玉凤.吉林大学.2018