Raji|人Burkitt’s淋巴瘤血清培养细胞(免费送STR)的应用

背景^[1-3]

Raji人Burkitt’s淋巴瘤血清培养细胞(免费送STR)由PulvertaftRJV于1963年从一位11岁黑人男孩的左上颌骨的Burkitt淋巴瘤中分离建立的，是个人类造血系统的连续传代细胞，为B细胞起源。该细胞中含有EBV，需要在二级生物安全柜中操作；可作转染宿主。

Raji人Burkitt’s淋巴瘤血清培养细胞(免费送STR)

细胞培养步骤：

一.培养基及培养冻存条件准备:

1)准备培养基;北美胎牛血清,10%;双抗1%。

2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二.细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

1.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

2.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

3.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;

1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

应用^[4][5]

Raji人Burkitt’s淋巴瘤血清培养细胞(免费送STR)可以用于去甲斑蝥素诱导人Burkitt淋巴瘤Raji细胞株表达免疫激活物激发外周血单个核细胞杀伤活性

去甲斑蝥素对Burkitt淋巴瘤Raji细胞株生物学特性的影响

对比研究NCTD对Raji细胞和人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的增殖抑制作用,探讨NCTD对Raji细胞的集落形成能力以及细胞周期的影响。

[方法]通过台盼蓝拒染法观察不同浓度的NCTD(0.15265、0.3125、0.625、1.25、2.5ug/ml)对Raji细胞及PBMC的增殖抑制情况；甲基纤维素半固体培养基集落形成法观察的NCTD(0.0.25.0.5、lug/ml)预处理48小时组和直接作用组对Raji细胞集落形成能力和自我更新能力的影；流响式细胞仪(Flow cytometry,FCM)检测NCTD(0.5ug/ml)作用48小时后对Raji细胞周期变化的影响。应用SPSS13.0软件进行数据分析,本实验数据资料以均数±标准差(x±s)表示,NCTD对Raji细胞及PBMC的增殖抑制实验和体外集落克隆形成实验使用析因设计资料的方差分析。NCTD对Raji细胞的细胞周期影响采用独立样本t检验,P<0.05认为差异有统计学意义。

[结果]在浓度为0.15-2.5ug/ml范围内NCTD抑制Raji细胞增殖,具有剂量时间依赖性,其24小时、48小时、72小时的IC50值分别为：0.88ug/ml0.47ug/ml、0.28ug/ml在24h各浓度下Raji细胞与PBMC比较差异具有统计学意义(F=1005.664,P=0.000)。且各浓度NCTD对PBMC既无增殖亦无毒性作用,各浓度间比较差异无统计学意义(F=0.866,P=0.517)。NCTD(0、0.25、0.5、lug/ml)直接作用组和预处理48小时组数据均显示,NCTD显著抑制Raji细胞的集落形成能力。随着药物浓度增加,细胞克隆数骤减(F=530.933,P=0.000),表明Raji细胞能在体外形成克隆集落,而NCTD能抑制Raji细胞的这种能力。在lug/mlNCTD直接作用下,14天及21天的Raji细胞集落形成明显受抑,集落形成数降低可达(1.00±1.00)及(2.67±1.15)个/孔。总体上NCTD直接作用组的集落数及集落大小明显小于NCTD预处理组(F=48.945,P=0.000)。NCTD能使Raji细胞发生细胞周期阻滞,Raji细胞经NCTD(0.5ug/ml)作用48小时后,G,/Go期及S期细胞百分数分别减少6.35%、13.23%(t=0.711,P=0.516)(t=1.708,P=0.163),G2/M期细胞百分数增加19.58%(t=-7.227,P=0.002),呈现G2/M期阻滞现象。

[结论]1、不同浓度下的NCTD能抑制Raji细胞增殖,具有剂量时间依赖性,但对PBMC既无增殖亦无毒性作用。

2、NCTD显著抑制Raji细胞的集落形成能力,对Raji细胞中具有自我更新和增殖潜能的细胞具有抑制克隆形成效应,同时持续平稳的药物浓度增强其抑制效应。

3、NCTD对Raji细胞增殖能力的抑制可能与其使Raji细胞产生G2/M期周期阻滞有关。

参考文献

[1]Investigation of NK cell function and their modulation in different malignancies[J].Gordana Konjevic;Vladimir Jurisic;Viktor Jovic;Ana Vuletic;Katarina Mirjacic Martinovic;Sandra Radenkovic;Ivan Spuzic.Immunologic Research,2012(1)

[2]NK cell MHC class I specific receptors(KIR):from biology to clinical intervention[J]..Current Opinion in Immunology,2012(2)

[3]Intussusception as a presenting feature of Burkitt lymphoma:implications for management and outcome[J].R.J.England;;K.Pillay;;A.Davidson;;A.Numanoglu;;A.J.W.Millar.Pediatric Surgery International,2012(3)

[4]Burkitt lymphoma in adults[J].David C.Linch.British Journal of Haematology,2012(6)

[5]余莉华.去甲斑蝥素诱导人Burkitt淋巴瘤Raji细胞株表达免疫激活物激发外周血单个核细胞杀伤活性[D].南方医科大学,2012.