通用细胞冻存液的产品说明

通用细胞冻存液简介^[1-3]

通用细胞冻存液以进口FBS、DMSO为主要原材料配制，适用于是各种哺乳动物原代细胞，传代细胞系和杂交瘤细胞等的冻存保种。本产品为即用型试剂，储存稳定，使用方便，细胞存活率高。

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%．15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。采用"慢冻快融"的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1到-2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。

通用细胞冻存液

细胞冻存原理：

细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以限度的保存细胞活力。如今细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

通用细胞冻存液的使用方法同其他细胞冻存液基本一致，原则上细胞每支安瓿含1-10×106/ml。

消化到位的贴壁细胞，或最后一次离心后弃掉上清液，加入细胞冻存液，重悬、吹散沉淀的细胞，分装入细胞冻存管，密封标记后按常规操作流程依次经4℃，-20℃，-80℃直至液氮罐或用程序降温仪逐级降温冻存。

通用细胞冻存液优点如下：

1、减少基因漂移；

2、减缓细胞系的衰老；

3、稳定表型；

4、减少微生物污染及交叉污染机会等。

细胞冷冻的原理在于尽可能降低细胞内的晶体形成，减少细胞内水凝固所形成的高浓度溶质对细胞造成的低温损伤，从提高细胞复苏时的存活率。细胞冻存的数量应保证复苏时低温保护剂获得1:10～1:20的稀释，稀释后的细胞浓度扔高于正常传代的细胞浓度为宜，这是因为当低温保护剂稀释10～20倍以后，该浓度一般不会对细胞造成毒性损伤。

通用细胞冻存液操作步骤:

1、培养细胞至对数生长晚期,显微镜观察其外观、形态、有无污染等,取状态良好的细胞进行冻存操作。如为贴壁生长细胞,用胰蛋白酶消化并用完全培养基终止消化,进行细胞计数;如为悬浮生长细胞,进行细胞计数。

2、500~1000g离心5min,弃上清。

3、加入适量的通用细胞冻存液,重悬细胞,使细胞浓度达到1~10×106/ml,置于冻存管中,密闭、不要拧的太紧,避免弯曲变形。

4、一般遵循1℃/min的速率进行冷冻。亦可采用4℃20min,-20℃30min,-70℃过夜,置于液氮罐中长期存储。

细胞冻存管融化

1.将细胞冻存管取出，浸入37℃水浴锅内，轻轻晃动，注意融化，当融得只剩一个小冰块时，将细胞插入冰中。

2.加入4℃预冷的培养基，用手指轻弹悬浮细胞团。

3.250g离心10min，去除上清液，再加入培养基，轻轻悬浮。

4. 尽量将细胞中的DMSO洗去，计数。

参考文献

[1]The History and Principles of Cryopreservation[J].D.Pegg.Semin Reprod Med,2002(01)

[2]Practical placental blood banking[J].Paolo Rebulla;;Lucilla Lecchi;;Laura Porretti;;Francesca Poli;;Ilaria Ratti;;Fulvio Mozzi;;Girolamo Sirchia.Transfusion Medicine Reviews,1999(3)

[3]Effects of long-term cryopreservation on hematopoietic progenitor cells in umbilical cord blood.[J].Mugishima H;;Harada K;;Chin M;;Suzuki T;;Takagi K;;Hayakawa S;;Sato K;;Klein J P;;Gale R P.Bone marrow transplantation,1999(4)