D-荧光素的发光原理与制备

D-荧光素是ー种依赖腺苷三磷酸（ATP)生物发光反应的底物，生物发光的原理是荧光素在ATP和氧存在条件下被荧光素酶氧化，其化学反应式如下：ATP+D-Luciferin+02→Oxyluciferin+AMP+PPi+0,+Light。荧光素/荧光素酶的生物发光反应常用于ATP、能转化为 ATP的代谢物（如AMP、ADP、cAMP)和能产生ATP的酶（如肌酸激酶等）的检测，因此生物发光反应可应用于广泛范围内生物材料的检测。

应用

近几十年来，ATP生物发光技术得到了很大的发展，已经在細胞増殖、細胞毒性和生物量计数等方面广泛应用。在食品卫生领域由于 ATP生物发光技术无需培养过程，操作简便、灵敏度高，数分钟内可得到結果，具有其它微生物检测方法无法比拟的优势，是目前检测微生物最快的方法。除此之外，荧光素酶基因可作为报告基因，在分子生物学上有广泛的应用。因此荧光素/荧光素酶生物发光反应具有很大的市场，D-荧光素作为生物发光反应的底物，随着ATP生物发光反应试剂需求的増加，其需求量越来越大。而D-荧光素目前国内主要依靠进ロ，其价格高，货期长，另外已有的国产产品含量低，发光活力不高，因此研制高纯度的D-荧光素有很好的市场前景和科学意义。

制备方法

一种高纯度D-荧光素的制备方法，它是由2-氰基-6-甲氧基苯并噻唑和盐酸吡啶进行高温脱甲基反应，然后提取脱甲基反应产物，经柱层析纯化，最后将纯化的脱甲基产物 2-氰基-6-羟基苯并噻唑与D-半胱氨酸进行缩合反应生成D-荧光素，纯化即得D-荧光素产品，其特征在干，所述的将纯化的脱甲基产物2-氰基-6-羟基苯并噻唑与D-半胱氨酸进行縮合反应生成D-荧光素，纯化即得D-荧光素产品是在充氮气的条件下，2-氰基-6-羟基苯并噻唑与D-半胱氨酸在碱性条件下进行缩合反应，反应完毕后在充氮气的条件下用有一定极性的非水溶性有机溶剂进行萃取，萃取后的水相用盐酸进行酸化，分离沉淀物，沉淀物用溶水性有机溶剂进行洗涤，离心去上清，沉淀物真空干燥，即获得高纯度D-荧光素产品。