JF305人胰腺癌细胞的用途

背景^[1-3]

JF305人胰腺癌细胞来源于人胰腺，呈上皮细胞样，贴壁生长。

JF305人胰腺癌细胞细胞特性：

1）来源：胰腺

2）形态：上皮细胞样，贴壁生长

3）规格：1×106cells

4）培养条件：1640+10%FBS+1%P/S；空气，95%；二氧化碳，5%，37℃。

JF305人胰腺癌细胞

JF305人胰腺癌细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，活细胞首先观察培养瓶是否完好，培养液是否漏液，培养基是否浑浊；冻存细胞是否干冰已挥发完，冻存管盖是否脱落，破碎，若有这类情况，请务必拍照记录，并于收货24h内与我们联系。

2）细胞处理：

复苏的细胞：如果是T-25培养瓶活细胞，收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理，然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。

JF305人胰腺癌细胞复苏、传代及冻存流程：

1、细胞复苏

1）配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；

2）细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；

4）24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。

2、细胞传代

1）待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆；

2）加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min；

3）收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。

3、细胞冻存

1）按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数；

2）用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。

3）放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。

用途^[4][5]

JF305人胰腺癌细胞可以用于DPC4基因对人胰腺癌细胞JF305生长和增殖的影响

通过研究肿瘤抑制基因DPC4对人胰腺癌细胞系JF305生物学行为的影响,探讨DPC4基因抑制胰腺癌生长的机制,为此癌的基因治疗提供理论及实验依据。

方法：选择无DPC4表达的人胰腺癌细胞系JF305为实验细胞,采用脂质体介导法将pBK-CMV-DPC4质粒导入JF305中,以转染空质粒pBK-CMV的JF305细胞为阴性对照,未转染的JF305为空白对照,并以含G418 400μg/ml的DMEM进行筛选培养,收集上述三种细胞,提取总RNA,采用RT-PCR法检测上述三种细胞中DPC4的表达;通过测定细胞生长曲线、细胞周期、细胞粘附率和细胞集落形成率检测人胰腺癌细胞系中JF305转染DPC4前后生长、增殖等生物学行为的改变。

结果：经G418选择性培养后只有转染质粒pBK-CMV-DPC4和pBK-CMV的JF305细胞仍然存活。转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞有DPC4基因表达,而未转染及转染空质粒的细胞无表达。通过细胞记数和MTT法测定发现转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞增殖能力同转染前及转染空质粒的JF305细胞相比明显受到抑制,细胞倍增时间显著延长,G1期细胞数所占比例明显增加,G2/M期细胞数所占比例明显下降,细胞克隆形成率和贴壁率均明显下降,两者差异显著,P<0.001。

结论：DPC4转染人胰腺癌细胞系JF305后,JF305可稳定表达DPC4。DPC4可使JF305细胞的G1期细胞明显增多,G2/M期细胞明显减少,而且明显抑制其生长和增殖能力,明显降低其增殖潜力和生存能力。表明DPC4的缺失与胰腺癌的发病关系密切,可能是胰腺癌发生、发展过程中的一个重要的分子事件。DPC4可能成为胰腺癌基因治疗的重要靶位基因。

参考文献

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[5]吴春燕.DPC4基因对人胰腺癌细胞JF305生长和增殖的影响[D].大连医科大学,2004.