RECOMBINANT HUMAN P53 MUTANT细胞肿瘤抗原P53 突变型的应用

背景^[1-3]

RECOMBINANT HUMAN P53 MUTANT细胞肿瘤抗原P53突变型是重组人P53突变型蛋白。RECOMBINANT HUMAN P53 MUTANT细胞肿瘤抗原P53突变型是将智人P53突变型基因导入真核表达体系（酵母）进行诱导表达产生的具有免疫源性的重组蛋白。

P53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因。在短短的十多年里，人们对P53基因的认识经历了癌蛋白抗原，癌基因到抑癌基因的三个认识转变，现已认识到，引起肿瘤形成或细胞转化的P53蛋白是P53基因突变的产物，是一种肿瘤促进因子，它可以消除正常P53的功能，而野生型P53基因是一种抑癌基因，它的失活对肿瘤形成起重要作用。

RECOMBINANT HUMAN P53 MUTANT细胞肿瘤抗原P53突变型免疫组化

P53基因在人类、猴、鸡和鼠等动物中相继发现后，对其进行了基因定位，人类P53基因定位于17P13.1，鼠P53定位于11号染色体，并在14号染色体上发现无功能的假基因，进化程度迥异的动物中，P53有异常相似的基因结构，约20Kb长，都由11个外显子和10个内含子组成，第1个外显子不编码，外显子2、4、5、7、8、分别编码5个进化上高度保守的结构域，P53基因5个高度保守区即第13～19、117～142、171～19 2、236～258、270～286编码区。

P53基因转录成2.5KbmRNA，编码393个氨基酸蛋白，分子量为53KD，P53基因的表达至少受转录及转录后二种水平的调控.在停泊生长或非转化细胞中P53mRNA水平很低，但刺激胞液后mRNA显著增加.持续生长的细胞，其mRNA水平不随细胞周期而出现明显变化，但经诱导分化后mRNA水平降低，部分是转录后调控。

P53基因的转录由P1、P2二个启动子控制.P1启动子位于外显子上游100～250bp，P2位于内含子内，在启动子中包含1个NF1蛋白结合位点和一个转录因子AP1相关蛋白的结合位点，对正常P53基因的转录，不仅需要二个启动子的平衡作用，而且P53基因内含子也起作用，如内含子中有正调控作用，其调控有组织特异性。

应用^[4-5]

RECOMBINANT HUMAN P53 MUTANT细胞肿瘤抗原P53突变型可以用于p53蛋白和抗体的血清流行病学研究

克隆、表达和纯化p53蛋白；制备鸡抗人p53蛋白的IgY抗体；建立血清p53蛋白和抗体的ELISA方法；初步描述血清p53蛋白和抗体在不同人群中的分布。方法扩增p53结构基因序列，插入到原核表达质粒pGEX-4T-1中，在大肠杆菌B121中诱导表达；以纯化的融合蛋白为抗原免疫母鸡，得到抗p53—IgY；在此基础上建立间接ELISA和双抗体夹心ELISA方法，分别检测不同人群血清抗体和p53蛋白，采用描述性方法比较各组人群p53蛋白和抗体阳性情况。

结果SDS—PAGE显示表达的GST-p53融合蛋白分子量约为80Kda；制备的抗p53—IgY可特异性识别原核细胞中的p53蛋白，不识别包括GST在内的其它细菌蛋白；间接ELISA和双抗体夹心ELISA检测结果显示，不同人群和不同恶性肿瘤的血清p53蛋白和抗体阳性率不同，蛋白阳性率最高的为职业暴露组(11.14％)和前列腺癌(12.50％)；抗体阳性最高的是恶性肿瘤组(14.59％)和卵巢癌(41.67％)；正常人群组蛋白和抗体阳性率分别为0.34％和1.02％；在部分癌前病变(如肝硬化、慢性乙肝、慢性胃炎、胃溃疡和慢性阑尾炎)中也检出p53抗体。

结论p53血清学指标在一定程度上反映了暴露、疾病和基因变化情况。观察血清p53变化的规律有助于对接触环境和职业致癌物的高危人群进行健康监护以及恶性肿瘤患者的早期诊断。在临床疾病的监测以及肿瘤病人的诊断中，血清p53抗体的应用价值较大；在职业致癌物暴露的监测中则以血清p53蛋白更为敏感。血清p53指标作为一种高特异、无创性、方法简便的肿瘤和职业暴露标志物就具有一定的实用价值。

参考文献

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[5]吴敏.p53蛋白和抗体的血清流行病学研究[D].中国人民解放军军医大学,2003.