氯羟柳胺的制备与残留检测研究

氯羟柳胺中文名：羟氯扎胺、五氯柳胺、羟氯柳苯胺等，英文名：Oxyclozanide; 2, 3, 5-Trichloro-N-(3, 5-dichloro-2-hydroxyphenyl)-6-hydroxybenzamide、3, 3, 5, 5', 6-Pentachloro-2'-hydroxysalicylanilide、(2, 3, 5, 5', 6-pentachlore)-2, 2'-dihydroxy penzanilide，分子式：C₁₃H₆C₁₅NO₃，分子量401.46，CAS登记号为2277-92-1，结构式如图1.1。氯羟柳胺为类白色或淡黄色粉末，在三氯甲烷中极微溶解，在乙醇中略溶，在丙酮中溶解，在水中不溶，熔点209~211℃，沸点215℃。

氯羟柳胺的合成路线

崔莹(2010)以2,4-二氯苯酚作为原料，在二氯甲烷和硝酸作用下，经过硝化反应制得2, 4二氯-6-硝基苯酚，再以钯碳作为催化剂，制得2, 4-二氯-6-氨基苯酚，与3,5,6-三氯水杨酸反应后，在15%NaOH溶液中升温溶解，降温后用HCI中和，得到氯羟柳胺纯品，总收率达到64.9%，纯度达到99.6%，合成路线如图。^[1]

刘祥宜等(2010)仍然以2, 4-二氯苯酚作为原料，在甲醇溶液中，经硝化反应得到2, 4-二氯-6-硝基苯酚，经还原得到2-氨基-4, 6-二氯苯酚，与3,5, 6-三氯水杨酸反应得到氯羟柳胺粗品，经活性炭吸附、降温结晶得到氯羟柳胺成品，总收率为54.8%，使用HPLC测得纯度为99.7%。合成路线如图。^[2]

王学成等(2017)对刘祥宜等的路线进行了改进，以催化加氢替代水合肼还原法，制得2 -氨基-4, 6-二氯苯酚，3,5, 6-三氯水杨酸在三乙胺和SOCl²作用下制备3, 5, 6-三氯水杨酸酰氯后，与2-氨基-4,6-二氯苯酚反应，经亚硫酸氢钠还原性脱色剂精制得到氯羟柳胺纯品。与原有工艺相比较，该方法操作更加简便，且不会产生大量的致癌性废水，且制得的氯羟柳胺性状更好。合成路线如图。总收率为87.5%，HPLC法测得纯度达99.9%。^[3]

氯羟柳胺的残留检测研究进展^[4]

最高残留限量(MRL)

EMEA以及CAC均制订了牛羊组织中氯羟柳胺最高残留限量(MRL)，限量值分别为肌肉20μg/kg、脂肪20ug/kg、肝500μg/kg、肾100μg/kg，奶10μg/kg。欧盟规定了氯羟柳胺在牛奶中的MRL为10ug/kg。我国目前无相关的药物上市，所以我国农业部未对氯羟柳胺的最高残留限量作出明确规定。

休药期

关于氯羟柳胺休药期的相关报道相对较少，Mohammed-Ali等(2010)研究表明，将五氯柳胺以15 mg/kg bw口服给药，测得其在羊血浆中半衰期为6.4天。Fujnuma等(2006)报道了将氯羟柳胺以10 mg/kg bw给药量给奶牛口服给药，测得其在血浆中的半衰期为7.4d，检测限为2ug/L；在奶中的半衰期为30~47h，检测限为1ug/L。欧盟(2004)规定，氯羟柳胺在牛、羊肌肉和组织中的休药期均为28天。

氯羟柳胺的残留检测方法

HPLC和GC法

Sidhu等(1987)选用C18 Bondapak色谱柱，以乙腈和0.05M磷酸二氢钾作为流动相，建立了测定药物制剂中氯羟柳胺含量的高效液相色谱法。

Bluthgen等(1982) 建立了测定奶样中氯羟柳胺含量的气相色谱法。

Khan等(2000)采用液相色谱法测定药物制剂中氯羟柳胺和奥芬达唑的含量，以甲醇和0.IM的磷酸二氢钠(7: 3，使用磷酸调pH= 4)作为流动相，建立的LC方法在6.0~8.5 ug/mL范围内线性关系良好，氯羟柳胺和奥芬达唑的检测线均为1 ug/mL，定量限分别为2~7μg/mL和3~10 ug/mL。

Jo等(2011)建立了牛肉及牛奶中氯羟柳胺残留检测的高效液相色谱法，以乙腈和0.1%磷酸(4 : 6)为流动相，出峰时间为8.3 min，定量限9.7~9.8 μg/ kg，回收率为70.70土7.90~110.79士14.95%。

王伟等(2013)采用HPLC法测定牛羊奶中氯羟柳胺、氯氰碘柳胺、碘醚柳胺的残留量，建立的HPLC方法在5μg/kg~500μg/kg范围内线性关系良好，R3>0.99，回收率在87.40%~94.74%之间，LOD为3μg/kg，LOQ为5μg/kg。

Sanabria等( 2014)使用HPLC法测定绵羊血浆及胃肠组织中氯羟柳胺的残留量，以乙腈/0.025 M乙酸胺(pH = 8.5) (40/60)作为流动相，检测波长为254 nm，测得定量限为0.1 ug/mL，在0.1μg/mL~40 μg/mL范围内，平均绝对回收率为75%~86%。

HPLC-MS/MS法

Whelan等(2010)采用HPLC-MS/MS法测得了牛奶和奶酪中氯羟柳胺的残留量，以0.01%的乙酸水:乙腈(9:1)(A液)和5mM甲酸铵甲醇溶液:乙腈(75: 25)(B液)作为流动相，测得氯羟柳胺的保留时间为6.83min，在给药后第三次(即第2天)采样时测得最高残留浓度范.围在8 μgkg ~ 24 μg/kg之间，在给药后第13次(即第7天)，测得氯羟柳胺含量小于1μg/kg，低于最高残留限量。

Sakamot等(2010)建立了HPLC-MS/MS法用于测定奶样中Bithionol、Bromofen、Nitroxynil、Oxyclozanide和Tribromsalan的残留量，以0.1% 甲酸和甲醇作为流动相，测得平均回收率在83.8% ~ 97.1%之间，RSD为1 .4~8.0%，检测限均为0.1mg/mL。

李帅鹏等(2014)建立了同时检测牛、羊组织中硝碘酚腈、氯羟柳胺、氯氰碘柳胺、碘醚柳胺4种药物的HPLC-MS/MS方法，该方法在1μg/L~100ug/L范围内线性关系良好，R2>0.99.在牛、羊组织中的L0D为1μg/kg，LOQ为2.5μg/kg， 回收率在71%~112%之间，日内RSD为1.1%~ 14.0%，日间RSD为6.4%~14.7%。

参考文献

[1] 崔莹. 驱虫药五氯柳胺的制备[J]. 现代商贸工业, 2010, 22(20): 300.

[2] 刘祥宜, 朱建民, 张建峰, 等. 五氯柳胺的合成[J]. 浙江化工, 2010, 41: 11-12.

[3] 王学成, 苏文杰, 朱建民, 等. 驱虫药五氯柳胺的合成工艺研究[J]. 精细石油化工, 2017, 34: 52-55.

[4] 白玉彬, 五氯柳胺混悬液的处方优化、质量控制及其在牛体内的药代动力学研究[D]. 中国农业科学院, 2019, 7-8.