7-羟基香豆素，巨噬细胞抑制迁移因子竞争性结合研究的亲和性荧光探针

巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）能够与CD74结合并激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路，从而抑制细胞凋亡，促进肿瘤生长、侵袭和血管生成。MIF在肿瘤发生发展过程中的重要作用，意味着MIF很有可能成为新的抗肿瘤药物靶点。

除了能够与CD74结合并诱导信号转导，MIF还有互变异构酶活性，且互变异构酶活性位点位于与CD74结合的氨基酸残基附近。因此，作者推测MIF互变异构酶活性抑制剂可能能够干扰MIF/CD74结合并阻碍MIF诱导的信号转导。IOS-1是首个MIF互变异构酶活性抑制剂，且研究表明其确实能够抑制MIF的细胞因子活性，这一结果证实了作者的猜想。但由于药效不足、理化性能差、化学反应活性差等原因，目前已知的抑制剂（如ISO-1，4-IPP和SCD-19）均没有进入临床开发阶段，因此需要更好的新型抑制剂来促进基础研究和药物开发。

以往测定MIF互变异构酶活性主要是通过免疫荧光催化4-HPP酮羰基和烯醇式之间互变异构，通过紫外吸收光谱中的相应变化来监测酶活性的变化。但是烯醇反应物在水环境中不稳定，并且这个反应的检测波长（306nm）特异性不高，因此，本文作者设计用荧光指示剂置换（FID）分析方法来测定MIF的异构化酶活性。

研究表明7-羟基香豆素和MIF酶活性位点有很高的亲和力，且伴随荧光猝灭。因此作者合成了多种7-羟基香豆素的衍生物，以4-HPP为底物测定这些衍生物对MIF的抑制作用，并对这些衍生物的构效关系进行研究，然后在此基础上合成出了更加优化的荧光探针（化合物7）。

后续实验表明：相比传统的免疫荧光法，以化合物7为荧光探针进行的FID分析更灵敏、精确，且能够在中性的PBS缓冲液中进行。这一结果证实化合物7是一种优良的MIF酶活性抑制剂和检测指示剂。除此以外，作者还发现由于化合物7和MIF的酶活性位点有非常高的亲和力，导致对附近的氨基酸残基产生影响，从而干扰MIF和CD74的结合，进而抑制癌细胞的增殖。

总结：作者以7-羟基香豆素为基本骨架，合成出了多种荧光探针，开发了新的分析方法来更好地测定MIF异构化酶活性。这些7-羟基香豆素衍生物中，化合物7和MIF酶活性位点亲和力高，抑制活性最强，且能够阻碍MIF/CD74结合，抑制A549细胞的增殖。这些结果为推进面向MIF的研究提供了非常有价值的方法和研究思路。