Defactinib (FAK抑制剂)的应用

背景^[1][2][3][4]

Defactinib (FAK抑制剂)是一种新型FAK抑制剂，抑制FAK在Tyr397位点磷酸化，这种作用具有时间和剂量依赖性。PTK2蛋白酪氨酸激酶2（PTK2），也被称为粘着斑激酶（FAK），是一种蛋白质，在人类中，由编码PTK2基因。PTK2是一种粘着斑相关蛋白激酶，参与细胞粘附（细胞如何相互粘连及其周围环境）和扩散过程（细胞如何移动）。已经表明，当FAK被阻断时，乳腺癌细胞由于活动性降低而变得较少转移。

该基因编码胞质蛋白酪氨酸激酶，其被发现集中在附着于细胞外基质成分的细胞中形成的粘着斑中。编码的蛋白质是蛋白酪氨酸激酶的FAK亚家族的成员，其包括PYK2，但缺乏与来自其他亚家族的激酶的显着序列相似性。它还包括一个大型FERM域。除某些类型的血细胞外，大多数细胞表达FAK。可以激活FAK酪氨酸激酶活性，这在细胞迁移中起着关键的重要早期作用。

FAK活性引发细胞内信号转导途径，促进细胞与细胞外基质的接触，促进细胞迁移。在开发过程中需要FAK，FAK的损失导致杀伤力。似乎矛盾的是，FAK不是细胞迁移所必需的，并且可能在细胞中发挥其他作用，包括肿瘤抑制因子p53的调节。至少四种转录变体编码四种不同的同种型已发现该基因，但已确定其中只有两个的全长性质。

FAK是一种125 kD的蛋白质，作为细胞间粘着动力学的参与者而被启动，并且在运动和细胞存活中起作用。FAK是一种高度保守的非受体酪氨酸激酶，最初被鉴定为致癌基因蛋白酪氨酸激酶v-src的底物。这种细胞溶质激酶参与多种细胞作用，包括细胞运动，丝裂原反应和细胞存活。FAK通常位于称为粘着斑的结构上，其是将细胞外基质（ECM）与细胞质细胞骨架连接的多蛋白结构。

粘着斑的其他组分包括肌动蛋白，细丝蛋白，vinculin，talin，paxillin，tensin和RSU-1。Defactinib以时间和剂量依赖的方式抑制Tyr397位点FAK磷酸化。Defactinib联合紫杉醇可显著降低肿瘤增殖，增加细胞凋亡，使肿瘤重量减轻92.7%-97.9%。RPPA数据显示Defactinib降低紫杉醇耐药细胞系中AKT和YB-1的水平。

Defactinib对pFAK(Tyr397)的表达均有明显的剂量依赖性抑制作用。Defactinib在3小时内抑制pFAK(Tyr397)表达，48小时后逐渐恢复表达。Defactinib剂量为25 mg/kg，每日2次或以上，在3小时时显著抑制pFAK(Tyr397)，24小时后恢复表达。因此，我们选择VS-6063,25 mg/kg，每日2次，作为后续治疗实验的给药方案。

治疗实验中，将腹腔内携带HeyA8肿瘤的雌性裸鼠随机分为4组(每组10只):1)每天2次口服载体，每周腹腔内注射磷酸盐缓冲盐水(对照组);2)VS-6063 25 mg/kg口服，每日2次;3)每周腹腔注射PTX;4)Defactinib 25 mg/kg口服2次，PTX腹腔注射1周。在HeyA8模型中，PTX单药减轻肿瘤重量87.4%，联合治疗减轻肿瘤重量，减少97.9%(P=0.05)。在SKOV3ip1模型中，联合组较PTX组肿瘤减轻92.7%(P<0.001)。

应用研究^[5]

Defactinib (FAK抑制剂)可用于人肝星状细胞Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的研究。研究方法用CCK-8法检测不同浓度范围(07μmol·L-1)FAK抑制剂（Defactinib）在12、24、48 h和72 h时对LX-2细胞增殖的影响,Real-time PCR分析PF562,271对LX-2细胞中α-SMA、CollagenⅠmRNA表达水平的影响,Western-blot检测不同浓度Defactinib对LX-2细胞中Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin蛋白表达的影响,评价Defactinib对LX-2细胞中Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响。

Defactinib能够抑制LX-2细胞增殖,且该作用呈剂量和时间相关性;qRT-PCR检测到Defactinib能够抑制LX-2细胞中α-SMA、collagenⅠmRNA表达,与对照组相比,表达量显著降低（P<0.05）;Western-blot结果显示Defactinib对Akt/GSK-3β的磷酸化表达水平显著降低（P<0.05）。结论:FAK抑制剂能够抑制LX-2细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过抑制Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路从而缓解肝纤维化进程。

参考文献

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[2]. AndréE,Becker-AndréM(January 1993)."Expression of an N-terminally truncated form of human focal adhesion kinase in brain".Biochemical and Biophysical Research Communications.190(1):140–7.doi:10.1006/bbrc.1993.1022.PMID 8422239.

[3]. Blackshaw SE,Dow JK,Lackie JM(1999).The dictionary of cell and molecular biology(3rd ed.).San Diego:Academic Press.ISBN 978-0-12-432565-4.

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[5]. FAK抑制剂对人肝星状细胞Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响[J].白瑞丹,张洪,黄萃园,高洁芳.中国医院药学杂志.2018(01)