人B淋巴细胞的应用

背景^[1-3]

人B淋巴细胞简称B细胞，来源于骨髓的多能干细胞。B淋巴细胞的祖细胞存在于胎肝（胚胎小鼠14天或通顺儿8-9周）的造血细胞岛（island of hematopoietic cells）中，此后B淋巴细胞的产生和分化场所逐渐被骨髓所代替。成熟的B细胞主要定居于淋巴结皮质浅层的淋巴小结和脾脏的红髓和白髓的淋巴小结内。B细胞在抗原刺激下可分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体（免疫球蛋白），主要执行机体的体液免疫（humoralimmunity）。

B淋巴细胞

B淋巴细胞简称B细胞，由骨髓中的淋巴干细胞增殖分化后，进入血液并散播到脾脏、淋巴结以及各处的淋巴组织，是抗体免疫的核心细胞。血液内的淋巴细胞有10％～15％是B细胞，在形态上与T细胞相似。

抗体免疫是在抗体参与下引起的一种特异性免疫。因为抗体一般都分布在体液里，所以又称体液免疫。

抗体是一组具有免疫活性的球蛋白，叫做免疫球蛋白，英文缩写为Ig是B细胞受抗原刺激后，经发育、增殖、转化为浆细胞而产生的。抗体有五种，即IgC、IgA、IgM、IgD和IgE。血浆中以IgC含量最高，IgA与IgM含量次之，IgD及IgE含量甚微。抗体存在于血液、淋巴液和组织液中，能中和细菌外毒素，并有加强吞噬细胞杀灭和溶解细胞外的细菌和病毒的作用。

应用^[4][5]

人B淋巴细胞可以用于重组人B淋巴细胞刺激因子（hsBLyS）对B淋巴细胞的免疫调节作用及其机制研究

通过离体原代培养的小鼠脾脏B淋巴细胞和小鼠为实验对象,运用细胞培养、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜分析等免疫学和细胞学技术,综合研究和观察了hsBLys在离体和在体条件下对B淋巴细胞的增殖、存活和分化的活性作用及其胞内Ca2+信号变化,从多个角度探讨了hsBLyS对免疫细胞特别是B淋巴细胞的发育分化乃至整体免疫系统的调控作用及其作用机制。

结果如下:1 hsBLyS对离体脾B淋巴细胞增殖及存活的影响用带有抗CD19的磁珠分离脾脏的B淋巴细胞,调整细胞浓度至1×10~5个/ml,适应性培养4h后加入hsBLyS或/和anti-IgM的不同浓度的工作液,继续培养一定时间后MTT法检测光吸收值。

结果表明:hsBLys单刺激能够诱导B淋巴细胞增殖,且hsBLyS在0.5-2μg/ml浓度范围内随着浓度升高而加强;hsBLyS+anti-IgM共刺激脾脏B细胞虽没有增殖,但进一步在LPS刺激后表现出增殖明显升高,其刺激指数极显著高于对照组:hsBLyS在体外可以延长B淋巴细胞的存活时间。提示:hsBLyS能够诱导体外培养的脾脏B淋巴细胞的存活和增殖,hsBLyS+anti-IgM共同作用能增强B淋巴细胞免疫活性。

2 hsBLyS单体及三聚体对离体脾B淋巴细胞作用比较用带有抗CD19的磁珠分离脾脏的B淋巴细胞,调整细胞浓度至1×10~5个/ml,适应性培养4h后加入hsBLyS单体或三聚体以及anti-IgM的不同浓度的工作液,继续培养一定时间后MTT法检测光吸收值。结果表明:加入hsBLvS三聚体培养的B细胞的增殖活性高于或显著高于对照组,而加入hsBLvS单体的B细胞与对照组相比变化不明显。提示:比较hsBLyS单体和三聚体对B淋巴细胞增殖变化,确认hsBLyS主要是以三聚体形式发挥生物学活性。

3 hsBLyS对离体脾脏B淋巴细胞分化的作用实验分两个系列。系列一:将分离的脾脏细胞悬液加入24孔细胞培养板,随机分为对照组、2.5μg/ml hsBLyS组、2.5μg/ml anti-IgM组和2.5μg/mlhsBLyS+2.5μg/ml anti-IgM组,每组3个平行孔,分别加入PBS、hsBLyS和/或anti-IgM工作液,培养72h。系列二:分组同系列一,只是在加入工作液培养24h之后,吸去各孔上清再加入LPS继续培养48h。培养结束后,各孔加入anti-CD45R/B220和anti-CD21单克隆荧光抗体标记,流式细胞仪分析hsBLyS对B淋巴细胞分化的影响。

参考文献

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[2]Functionally significant mutations in the Epstein-Barr virus LMP1 gene and their role in activation of cell signaling pathways[J].S.V.Diduk;;K.V.Smirnova;;O.A.Pavlish;;V.E.Gurtsevitch.Biochemistry(Moscow),2008(10)

[3]Multiple roles of LMP1 in Epstein-Barr virus induced immune escape[J].J.M.Middeldorp;;D.M.Pegtel.Seminars in Cancer Biology,2008(6)

[4]Therapeutic Applications of Synthetic CpG Oligodeoxynucleotides as TLR9 Agonists for Immune Modulation[J]..BioDrugs,2007(6)

[5]曹萌.重组人B淋巴细胞刺激因子（hsBLyS）对B淋巴细胞的免疫调节作用及其机制研究[D].南京师范大学,2005.