人ΑL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人ΑL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA KIT用于检测血液、血清、胸腹水等其他体液中ΑL岩藻糖苷酶(AFU)的含量。

实验原理：人ΑL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA KIT是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被ΑL岩藻糖苷酶(AFU)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ΑL岩藻糖苷酶(AFU)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人ΑL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA KIT

标本要求

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

操作流程

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

人ΑL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA KIT用于血清寡糖链、甲胎蛋白及α-L-岩藻糖苷酶在HBV相关肝细胞癌中的应用价值研究

研究血清寡糖链(serum oligosaccharide chain test,G-test)、甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)、α-L-岩藻糖苷酶(alpha-L-fucosidase,AFU)单独及联合检测在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的诊断价值。

方法:本研究收集了341例患者的血清学检查结果和临床资料。纳入128例HBV相关HCC患者和200例良性肝病(Benign liver diseases,BLD)患者,排除13例干扰患者。根据肿瘤体积大小及血清HBVDNA载量将HCC患者分为:HCC患者、小肝癌(small HCC,sHCC)患者、HBV DNA阳性(HBV DNA+)HCC患者和HBVDNA阴性(HBVDNA-)HCC患者。基于所选变量,建立Logistic回归模型,绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,G-Test、AFP、AFU单独和联合诊断鉴别不同类型HBV相关HCC的能力通过计算ROC曲线下面积(areas under the ROC curve,AUCs)比较。

结果:1.评估患者的血清G-Test、AFP、AFU水平,发现HCC组患者的血清G-Test、AFP、AFU水平均显著高于BLD组患者,差异均有统计学意义(P均<0.001)。

2. 三种肿瘤标志物单独诊断HCC的AUC,由高到低分别为:G-Test、AFU、AFP,分别对应:0.84(95%CI 0.80-0.89)、0.79(95%CI 0.74-0.85)、0.75(95%CI 0.70-0.81)。G-Test的AUC显著高于AFP的AUC(P<0.05),与AFU的AUC相比,差异无统计学意义(P>0.05)。AFP与AFU的AUC相比,差异无统计学意义(P>0.05)。三种肿瘤标志物联合诊断HCC患者的AUC为0.93(95%CI 0.90-0.96),显著高于各标志物单独诊断及两标志物联合诊断的AUC(P均<0.05)。

3. 三种肿瘤标志物单独诊断small HCC的AUC,由高到低分别为G-Test、AFU、AFP,分别对应的AUC为0.81(95%CI 0.76-0.87)、0.72(95%CI 0.65-0.80)、0.63(95%CI 0.56-0.70)。G-Test诊断small HCC的AUC显著高于AFP(P<0.05)。G-Test、AFU两种肿瘤标志物的组合诊断small HCC患者的AUC为0.89(95%CI 0.84-0.93),与三种肿瘤标志物联合诊断的AUC无显著差异,显著高于各肿瘤标志物单独诊断及G-Test与AFP联合、AFP与AFU联合诊断的AUC(P均<0.05)。AFP和AFU在诊断small HCC时的AUC较诊断HCC时显著下降(P<0.05),G-Test的AUC变化无统计学意义(P>0.05)。

4.三种肿瘤标志物单独诊断HBV DNA阳性HCC的AUC,由高到低分别为G-Test、AFP、AFU,分别对应0.84(95%CI 0.78-0.90)、0.80(95%CI 0.73-0.86)、0.79(95%CI 0.72-0.87)。G-Test的AUC与AFP、AFU的AUC相比,差异均无统计学意义(P>0.05),且AFP与AFU的AUC相比,差异也无统计学意义(P>0.05)。三种肿瘤标志物的组合诊断HBVDNA阳性的HCC患者的AUC为0.93(95%CI 0.89-0.97),显著高于各标志物单独诊断及两标志物联合诊断的AUC(P均<0.05)。

参考文献

[1][1]Interpretation of HBV Serologies[J].Zamor Philippe J.;Lane Ashley M..Clinics in Liver Disease,2021(4)

[2]The Applicability of ADA,AFU,and LAC in the Early Diagnosis and Disease Risk Assessment of Hepatitis B-Associated Liver Cirrhosis and Hepatocellular Carcinoma[J].Zhang Wei;Chen Zhong;Xue Chengjun;Zhang Yao;Wu Lipei;Zhu Jichao;Xuan Shihai;Tian Jiale;Pang Zhi.Frontiers in Medicine,2021

[3]N-glycan fingerprint predicts alpha-fetoprotein negative hepatocellular carcinoma:A large-scale multicenter study.[J].Huang Chenjun;Fang Meng;Feng Huijuan;Liu Lijuan;Li Ya;Xu Xuewen;Wang Hao;Wang Ying;Tong Lin;Zhou Lin;Gao Chunfang.International journal of cancer,2021

[4]Global Cancer Statistics 2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries[J].Sung Hyuna;Ferlay Jacques;Siegel Rebecca L.;Laversanne Mathieu;Soerjomataram Isabelle;Jemal Ahmedin;Bray Freddie.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2021(3)

[5]张洁.血清寡糖链、甲胎蛋白及α-L-岩藻糖苷酶在HBV相关肝细胞癌中的应用价值[D].山东大学,2022.