大鼠前列腺干细胞的应用

背景^[1-3]

大鼠前列腺干细胞分离自前列腺组织；前列腺（Prostate)是雄性特有的性腺器官；前列腺是不成对的实质性器宫，由腺组织和肌组织构成。前列腺如栗子，底朝上，与膀胱相贴，尖朝下，抵泌尿生殖膈，前面贴耻骨联合，后面依直肠。前列腺腺体的中间有尿道穿过，扼守着尿道上口，所以，前列腺有问题时，排尿首先受影响。前列腺是机体非常少有的，具有内、外双重分泌功能的性分泌腺。作为外分泌腺，前列腺每天分泌前列腺液，是构成精液主要成分；作为内分泌腺，前列腺分泌的激素称为“前列腺素”。

大鼠前列腺干细胞

大鼠前列腺干细胞制备：

1.取出大鼠后沥干酒精，放入超净台内，固定在泡沫板上。

2.用镊子提起皮肤，用解剖剪剪开皮肤一个横切口，将皮肤向上撕开，然后剪开肌肉等，暴露出腹腔，找到前列腺，用弯头眼科镊取出前列腺，置于无菌培养皿中。

3.用生理盐水将取出的前列腺清洗多次，并剔除多余无用的组织。

4.将筛网置于平皿中，前列腺置于筛网上，用弯头镊镊住，轻轻在筛网上进行碾磨，同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。

5.将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中，离心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。

6.加入10ml培养液，吹打混匀，取样计数。

7.将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中，轻轻摇晃混匀，在培养瓶上。

应用^[4][5]

大鼠前列腺干细胞用于骨髓间充质干细胞抑制大鼠慢性前列腺炎作用机制的研究

利用贴壁培养法分离、培养及扩增bmscs;通过超声引导下注射大肠埃希菌建立大鼠cbp模型;通过超声复合微泡促进bmscs向前列腺归巢,发挥其抑制炎症反应的作用。本研究有望拓宽对bmscs免疫调节机制的认识,为临床慢性前列腺炎的防治提供新的策略。

方法:1.取3周雄性sd大鼠双侧股骨骨髓,采用贴壁培养法分离、培养及扩增bmscs,进行细胞表面标记物及诱导分化鉴定。gfp-luc腺病毒转染、标记bmscs,并检测荧光标记后细胞的增殖特性。

2. 超声引导下向220-250gsd大鼠前列腺内注射e.coli,建立大鼠cbp模型,通过细菌培养法检测建模成功性,观察建模后大鼠生存情况及生物学行为改变情况。

3.尾静脉输注bmscs,利用超声复合微泡促进bmscs向前列腺归巢,并检测相关炎症因子改变情况,观察病理形态的改善。

结果:1.分离、培养的bmscs,具有成骨及成脂分化潜能;荧光标记后的bmscs未改变增殖活性。

2.超声引导注射法成功建立大鼠CBP模型,经检测前列腺内有大肠埃希菌生长,建模后大鼠出现尿频症状,未发现死亡现象。

3.超声复合微泡促进BMSCs向前列腺归巢。经静脉输注BMSCs2周后,前列腺组织病理学观察见CBP组、CBP+BMSCs组、CBP+MEUS组前列腺管腔上皮层增生,层次增加,形状呈瘤样,可见上皮细胞坏死;间质内见大量炎症细胞浸润,大量纤维组织增生,与正常对照组比较有显著差异（P＜0.01）;CBP+MEUS+BMSCs组见前列腺管腔结构较完整,间质内炎症细胞少量浸润,纤维组织增生程度较CBP组显著减轻（P＜0.01）。RT-PCR检测结果示TNF-α及IL-1βmRNA含量在CBP组、CBP+BMSCs组、CBP+MEUS组表达显著高于正常对照组和CBP+MEUS+BMSCs组（P＜0.05）。ELISA分析显示CBP组、CBP+BMSCs组、CBP+MEUS组炎症因子TNF-α和IL-1β含量均显著高于正常对照组和CBP+MEUS+BMSCs组（P＜0.01）。而CBP+MEUS+BMSCs组与正常对照组比较,TNF-α和IL-1β含量增高无统计学差异（P＞0.05）。

结论:1.利用贴壁培养法可成功于体外分离、培养BMSCs,为下一步实验奠定基础。

2.超声引导注射细菌建立大鼠慢性细菌性前列腺炎模型较传统方法比较,创伤小,并发症少,死亡率低。

3.静脉输注的BMSCs在超声复合微泡协助下可向前列腺聚集,并发挥免疫调节作用,抑制前列腺内炎症反应,相关机制有待进一步研究。

参考文献

[1]Inflammation‐mediated abrogation of androgen signaling:An in vitro model of prostate cell inflammation[J].Bilge Debelec‐Butuner,Cansu Alapinar,Lokman Varisli,Burcu Erbaykent‐Tepedelen,Syed Muhammad Hamid,Ceren Gonen‐Korkmaz,Kemal Sami Korkmaz.Mol.Carcinog..2014(2)

[2]Urinary tract infections and bacterial prostatitis in men[J].Florian M.E.Wagenlehner,Wolfgang Weidner,Adrian Pilatz,Kurt G.Naber.Current Opinion in Infectious Diseases.2014(1)

[3]Human Mesenchymal Stem Cell Microvesicles for Treatment of Escherichia coli Endotoxin‐Induced Acute Lung Injury in Mice[J].Ying‐gang Zhu,Xiao‐mei Feng,Jason Abbott,Xiao‐hui Fang,Qi Hao,Antoine Monsel,Jie‐ming Qu,Michael A.Matthay,Jae W.Lee.Stem Cells.2014(1)

[4]Mechanisms of Prostate Permeability Triggered by Microbubble-Mediated Acoustic Cavitation[J].Tao Li,Guancheng Liu,Jie Li,Xiang Wang,Quanquan Liu,Zheng Liu,Wenhua Du.Cell Biochemistry and Biophysics.2012(2)

[5]韩广玮.骨髓间充质干细胞抑制大鼠慢性前列腺炎作用机制的研究[D].第三军医大学,2015.