人抗核糖核蛋白抗体(RNP-AB)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人抗核糖核蛋白抗体(RNP-AB)ELISA试剂盒 用于测定人血清、血浆及相关液体样本抗核糖核蛋白抗体(RNP-AB)含量。

实验原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被抗核糖核蛋白抗体(RNP-AB)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗核糖核蛋白抗体(RNP-AB)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人抗核糖核蛋白抗体(RNP-AB)ELISA试剂盒

样本处理及要求

1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

人抗核糖核蛋白抗体(RNP-AB)ELISA试剂盒用于抗核糖体P蛋白抗体、抗磷脂抗体与神经精神性狼疮的相关性研究

探讨脑脊液及血清中抗核糖体P蛋白抗体、抗磷脂抗体与神经精神性狼疮（NPSLE）的关系。

方法：采用ELISA法,同时检测NPSLE组、非NPSLE组、颅内感染组、健康对照组的脑脊液和血清中的抗核糖体P蛋白抗体、抗磷脂抗体浓度。计量资料比较采用独立样本t检验；小样本率的比较采用Fisher精确检验；相关性的分析采用Logistic回归；以双侧P＜0.05为差异有统计学意义。

结果：脑脊液中抗核糖体P蛋白抗体浓度：NPSLE组3.953±1.392；非NPSLE组2.700±0.576；颅内感染组2.988±0.840；健康对照组3.062±0.652。血清中抗核糖体P蛋白抗体浓度：NPSLE组15.991±19.709；非NPSLE组20.712±22.097；颅内感染组3.470±0.761；健康对照组4.130±2.052。脑脊液中抗磷脂抗体的浓度：NPSLE组133.700±29.980；非NPSLE组177.650±188.296；颅内感染组113.800±8.679；健康对照组109.300±7.102。血清中抗磷脂抗体的浓度：NPSLE组513.850±538.582；非NPSLE组670.400±619.335；颅内感染组145.400±77.838；健康对照组116.350±4.859。

两两对比结果：NPSLE组和非NPSLE组脑脊液、血清中的抗核糖体P蛋白抗体、抗磷脂抗体的浓度均显著高于颅内感染组和健康对照组,有统计学意义（P＜0.05）；颅内感染组、健康对照组脑脊液及血清中两种抗体的浓度比较均无显著性差异（P＞0.05）；NPSLE组抗Sm抗体阳性率显著高于非NPSLE组,有统计学意义（P＜0.05）；NPSLE组头痛、情绪障碍的阳性率显著高于非NPSLE组,有统计学意义（P＜0.05）:NPSLE组影像学（MRI）表现中脱髓鞘改变、缺血灶、异常信号阳性率均显著高于非NPSLE组,有统计学意义（P＜0.05）；

相关性分析：脑脊液中抗磷脂抗体的浓度与患者出现头痛的阳性率呈正相关（OR=2.126;95%CI:1.169～3.867;P＜0.05）,脑脊液中抗磷脂抗体的浓度越高越容易出现头痛。

结论：研究表明脑脊液中的抗核糖体P蛋白抗体、血清中的抗Sm抗体可能是神经精神性狼疮的标志物；SLE患者颅脑MRI检查出现脱髓鞘改变、缺血灶、异常信号表现时,临床表现出现头痛、情绪障碍时应高度怀疑NPSLE;NPSLE患者头痛症状可能与脑脊液中抗磷脂抗体有关。

参考文献

[1]Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein B1 as a new marker of early detection for human lung cancers.Sueoka E,Goto Y,Sueoka N,et al.Cancer Research.1999

[2]The roles of heterogeneons nuclear ribonucleoproteins（hnRNP）in KNA metabolism.Weighardt F,Biamonti G,Riva S.Bioessays.1996

[3]Structure and expression of the gene（HNRPA2B1）encoding the human hnRNP protein A2/B1.Tomoko K,Birgit H,Klaus PS.Genomics.1995

[4]A simple single-step technique for selecting and cloning hybridoms for the production of monoclonal ntibodies J.Immunol.Davis JM,et al.Methods.1982

[5]温大蔚.抗核糖体P蛋白抗体、抗磷脂抗体与神经精神性狼疮的相关性研究[D].青岛大学,2014.