人胃蛋白酶原C(PG-C)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人胃蛋白酶原C(PG-C)ELISA试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中胃蛋白酶原C(PG-C)的含量。

检测原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中胃蛋白酶原C(PG-C)水平。用纯化的胃蛋白酶原C(PG-C)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胃蛋白酶原C(PG-C)，再与HRP标记的胃蛋白酶原C(PG-C)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃蛋白酶原C(PG-C)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中胃蛋白酶原C(PG-C)浓度。

人胃蛋白酶原C(PG-C)ELISA试剂盒

操作步骤

1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在孔、第二孔中分别加标准品100μl，然后在孔、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800ng/L,1200ng/L,600ng/L,300ng/L,150ng/L）。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

应用^[4][5]

人胃蛋白酶原C(PG-C)ELISA试剂盒用于胃蛋白酶原、促胃液素-17在胃癌前疾病中的临床研究

通过检测不同胃癌前疾病阶段胃蛋白酶原-Ⅰ（PG-Ⅰ）、胃蛋白酶原-Ⅱ（PG-Ⅱ）、PG-Ⅰ/PG-Ⅱ比率（PGR）和促胃液素-17（G-17）的水平,初步探讨PG-Ⅰ、PG-Ⅱ、PGR和G-17对胃癌前疾病的筛查价值。更好的在胃镜检查前识别胃癌高风险群体,研究一种初步筛查胃癌前疾病的非创伤性普查手段。

方法:选取胃镜检查的472例消化道疾病患者为研究对象,根据胃镜和病理学检查结果,分析比较不同病理分组（浅表性胃炎组、萎缩性胃炎组、异型增生组）、萎缩性胃炎患者不同萎缩部位（胃窦萎缩组、胃体萎缩组、胃窦+胃体萎缩组）PG-Ⅰ、PG-Ⅱ、PGR、促胃液素-17水平差异。采用受试者工作特征（ROC）曲线计算PG和促胃液素-17诊断萎缩性胃炎的临界值。

结果:1、与浅表性胃炎组相比,萎缩性胃炎组和异型增生组患者的PG-Ⅰ和PGR水平明显降低（P＜0.05）;萎缩性胃炎组和异型增生组患者PG-Ⅰ、PGR水平差异无统计学意义（P＞0.05）。

2、与胃体萎缩组相比,胃窦萎缩组、胃窦+胃体萎缩组患者促胃液素-17水平降低（P＜0.05）。与胃窦萎缩组相比,胃体萎缩组患者PG-Ⅰ、PGR水平降低（P＜0.05）。

3、根据ROC曲线,以PGR≤10.95和促胃液素-17≥9.95 pmol/L联合检测诊断效率更高,且胃癌前状态组PGR与促胃液素-17联合检测的检出率高于浅表性胃炎组（P＜0.05）。

结论:PG-Ⅰ、PGR的降低提示了胃癌前疾病的高风险。PG-Ⅰ、PGR和G-17水平的降低可用于提示不同胃黏膜萎缩部位。PG与G-17联合检测的参考意义更大。鉴于血清学检测的非侵入性和低风险性,可研究以PG-Ⅰ、PGR和G-17为基础的多指标预测模型,从而识别中国人群胃镜检查前胃癌高风险群体来降低胃癌发病率和死亡率。

参考文献

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[5]费丽红.胃蛋白酶原、促胃液素-17在胃癌前疾病中的临床研究[D].蚌埠医学院,2022.