(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐的合成

简介

(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐被用作靶向泛素化的调节剂，特别是多种多肽和其他蛋白质的抑制剂/或以其他方式被双功能化合物抑制。其一端包含一个von Hippel与泛素连接酶结合的Lindau（VHL）配体，另一端是与靶蛋白结合的部分，使得靶蛋白被放置在泛素连连酶附近以实现降解[1]。

图1 (2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐的结构式。

合成

图2 (2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐的合成路线[1]。

步骤1：将4-溴苯甲腈（5.1克，28毫摩尔，1当量）、4-甲基噻唑（5.56克，56毫摩尔，2当量）乙酸钾（5.5克，56毫摩尔，2 eq）、乙酸钯（II）（63毫克，0.28毫摩尔，1%工具）溶解在二甲基乙酰胺中并在氩气下搅拌。（CITE JOC，2009，74，1179）将混合物加热至150°C并搅拌19小时，然后用500 mL EtOAc稀释，并用300 mL水洗涤4次。然后用300mL EtOAc反萃取次洗涤液，然后用100mL水洗涤4次。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，得到与报道的光谱数据相符的产物。然后将固体溶解在MeOH（280 mL）中并冷却至4℃。加入氯化钴（9.9克，41.6毫摩尔，1.5当量），然后缓慢分批加入硼氢化钠（5.2克，139毫摩尔，5当量），伴随剧烈起泡。90分钟后，加入水和氢氧化铵使反应停止。混合物用氯仿萃取4次，并通过柱色谱（10-30%0.5M NH3（MeOH）/DCM）纯化。较深的油，产率4.12克，20.2毫摩尔，73%。

步骤2：将（2S，4R）-1-（叔丁氧基羰基）-4-羟基吡咯烷-2-羧酸（366 mg，1.58 mmol，1当量）溶解在15 mL DMF中，并加入EDC（380 mg，2.0mmol，1.3当量），搅拌5分钟后加入HOBt（310 mg，2.0 mmol，1.5当量）（4-（4-甲基噻嗪-5-基）苯基）甲胺（325 mg，1.58mmol，1当量。搅拌15小时后，用25mL EtOAc稀释反应物，并用25mL盐水（2X）洗涤，然后用25mL饱和NaHCO3（2X）洗涤。将有机层浓缩，得到产物。黄色油，产率650 mg，98%。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ8.67（s，1H），7.43-7.29（m，4H），4.49（d，J=16.7 Hz，4H），3.51（dd，J=11.0，4.7 Hz，2H），2.61-2.45（m，4 H），2.03（d，J=7.4 Hz，2H），1.42（s，9H）。TLC：（9:1 DCM:MeOH（0.5 N NH3））Rf=0.20；毫秒（ESI）41715（M+H）+。

步骤3：将（2S，4R）-叔丁基4-羟基-2-（（4-（4-甲基噻唑-5-基）苄基）氨基甲酰基）吡咯烷-1-甲酸酯（8g，19mmol）在甲醇（30mL）和二氯甲烷（20mL）的混合物中的溶液用4M盐酸在1，4-二恶烷（8mL，32mmol）中的溶液处理。将混合物在环境温度下搅拌2小时。将溶剂蒸发至干，残余物在二氯甲烷中研制，过滤并在真空下干燥，得到标题化合物。6.7克，99%。LCMS RT=0.51分钟，ES+ve m/z 318[m+H]+。

步骤4：将（2S，4R）-4-羟基-N-（4-（4-甲基噻唑-5-基）苄基苄基）吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐（70mg，0.20mmol）和（S）-2-（（叔丁氧基羰基）氨基）-3，3-二甲基丁酸（可从例如Fluka购得）（50mg，0.22mmol）在DMF（1mL）的DMF（1 mL）中的搅拌混合物用DIPEA（0.14mL，0.79mmol）处理，然后用HATU（90mg，0.0.22mmol）处理，-并在环境温度下搅拌30分钟。通过质量导向自动制备HPLC（甲酸改性剂）纯化产物，得到中间体boc保护产物。然后将中间体溶解在二氯甲烷（0.5mL）和甲醇（0.1mL）的混合物中，并用4M盐酸在1，4-二恶烷（0.25mL，1.0mmol）中处理。在环境温度下搅拌1小时后，将反应混合物蒸发至干，残余物用二氯甲烷研成固体，并在真空下干燥，得到标题化合物(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐。76 mg，82%。

参考文献

[1] C.M. Crews, D. Buckley, A. Ciulli, W. Jorgensen, P.C. Gareiss, I. Van Molle, J. Gustafson, H.-S. Tae, J. Michel, D.W. Hoyer, A.G. Roth, J.D. Harling, I.E.D. Smith, A.H. Miah, S.A. Campos, J. Le, Compounds and methods for the enhanced degradation of targeted proteins and other polypeptides by an E3 ubiquitin ligase, particularly targeting the von Hippel-Lindau E3 ubiquitin ligase using hydroxyproline analogs to disrupt the VHL/HIF-1α interaction, Yale University, USA; GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited; Cambridge Enterprise Limited University of Cambridge . 2013, p. 509pp.