柯里拉京的作用

背景及概述^[1][2]

柯里拉京(corilagin，Cor)，1-酰-3，6-六羟基联苯二甲酰基葡萄糖，又称柯子次鞣素，诃里拉京，鞣(料)云实精，属天然植物多酚单宁酸类化合物，为白色针晶粉末，是叶下珠、老鹳草、蜜柑草、白三草等植物中的有效成分，也存在于余甘子、龙眼、橄榄等具有抗氧化抗衰老功效的植物中。研究表明，Cor 具有抗肿瘤、抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗纤溶、降血压、抑制病毒、抗菌、抗炎等广泛的生物学活性，具有很大的药用价值，市场前景广阔，已成为近年来热点研究的天然活性成分之一。柯里拉京是叶下株属植物的主要活性成分。

近十几年来，研究发现柯里拉京在抗肿瘤、治疗心血管疾病等方面具有较高的生物活性，许多富含柯里拉京植物的漫长药用史提示柯里拉京的不良反应小，是一类应用前景广阔的天然化合物。

但是目前对柯里拉京的研究还存在许多亟待解决的问题如：(1)分离技术针对性差：多采用传统提取方法，分离效果差，很多研究都是柯里拉京与其它多酚的混合物，干扰因素多；(2)柯里拉京研究缺乏深度和广度：主要停留在提取分离，结构鉴定阶段；(3)构效关系、结构修饰及作用制等方面的研究较少，目前仅局限在初步的生物活性研究；(4)对柯里拉京化学合成的研究欠缺，目尚未发现对柯里拉京化学合成的报道。因此，柯里拉京药效和机制的深入研究任重道远。

结构

药理作用^[1][2]

1.抗肿瘤作用

近年来中草药有效成分的抗肿瘤活性研究一直是医药领域研究的热点，对于柯里拉京抗肿瘤活性研究的报道也较多，研究表明柯里拉京对多种肿瘤有明显的抑制作用。

体外试验显示柯里拉京对人卵巢癌细胞(A2780)、鼻咽癌细胞(KB)、骨肉瘤细胞(OS-732)、人肺腺癌(A549)和人结肠癌细胞(HCT-8)等有明显抑制生长作用，IC50 分别为0.25，1.2，7.42，8.25，9.08 μg·mL−1；对人白血病细胞(HL-60)、T-淋巴细胞白血病细胞(Molt-3) 、鼻咽癌上皮細胞(NPC-BM1)、人成纤维肉瘤(HT1080)、人肝癌细胞(HepG2)和急性髓系白血病细胞(K-562)等IC50分别为0.12，0.35，0.81，1.02，1.42，1.53 mg·mL；Cor 对人胰腺癌细胞(Bxpc-3)也具有显著的抑制作用：5 μg·mL48 h 抑制率可达50%左右，20 μg·mL作用72 h 后抑制率达80%以上，呈一定的时间-浓度依赖性。

体内研究显示柯里拉京对小鼠肝癌H22 具有较明显的抑制作用，21.5 mg·kg ip×5 抑瘤率为52.70%， 与化疗药环磷酰胺(CTX)合用可提高到61.45%；对小鼠P388 淋巴细胞白血病有一定抑制作用，21.5 mg·kg，ip×13 小鼠生命延长率为55.3%；对小鼠路易斯肿瘤、裸鼠移植人OS-732、HCT-8 也显示出较好的抑制作用。

柯里拉京抗肿瘤的机制尚未明确，可能有以下几个方面：①调控癌细胞增殖周期，抑制肿瘤细胞增殖，诱导癌细胞凋亡：流式细胞检测，柯里拉京主要阻滞Bxpc-3 于S期，同时也作用于G2-M，并检测到明显的凋亡峰；②通过线粒体通路和死亡受体通路诱导细胞凋亡：叶下珠属Phyllanthus urinaria通过下调肺癌细胞(LLC)、Dalton淋巴腹水癌细胞(DLA)的抗凋亡蛋白Bcl-2，增加caspase-3活性诱导凋亡，还可上调Fas受体表达诱导神经酰胺介导的HL-60细胞凋亡；③对酶活性的调节作用：可抑制人端粒酶逆转录酶基因、人端粒末端转移酶相关蛋白1及c-myc mRNA的表达，降低端粒酶活性， 增加人鼻咽癌细胞(NPC-BM1)的凋亡；④抑制肿瘤细胞拓扑异构酶Ⅰ的活性。

2. 心血管保护作用

柯里拉京在心血管系统的保护作用主要集中在其抗高血压、抗凝降纤作用，抑制血栓形成、预防缺血再灌注损伤、抑制低密度脂蛋白的氧化等方面。从无患子科植物Euphoria longanaLam.的种子纯化得到逆没食子酸鞣质Cor，以自发性高血压大鼠模型实验，剂量为5 mg·kg时与1 mg·kg的胍乙啶作用相当；在切除肾上腺大鼠中可剂量依赖性减少血浆中的去甲肾上腺素；此外，还可减弱甲氧明的升压效应，显示血管活性。减少去甲肾上腺素的释放和或直接舒张血管起作用可能为其抗高血压作用机制。

3. 肝脏保护作用

清除自由基、抗氧化作用是柯里拉京具有多重生物学效应的重要机制之一，除对动脉粥样硬化外，对肝炎有着较好的防治作用。在临床上，以叶下珠为原料的保肝药“叶下珠片”，“叶下珠胶囊”等有显著疗效。柯里拉京是治疗乙肝的傣药叶下珠的有效成分之一，可抑制过氧化物对肝脏的损伤。从使君子科植物榄仁树Terminalia catappa L.树叶分离到的Cor 具有很强的清除DPPH 和超氧阴离子作用。

腹腔注射Cor预处理可显著降低Gal N/LPS 诱导的小鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶和谷胱甘肽S-转移酶升高，也减轻了肝线粒体脂质过氧化作用。通过抑制氧化压力和凋亡对抗Gal N/LPS诱导的肝损伤，起保护作用。叶下珠属林奈抗氧化组分之一的Cor 可以减轻自由基ROO·对蛋白质和脂质的损伤以及·OH 诱导损伤质粒DNA 以保护大鼠肝线粒体。

Phyllanthusurinaria 可剂量依赖性减少蛋氨酸- 胆碱缺乏(MCD)培养的肝细胞(AML-12 以及原代肝细胞)脂肪变性，降低ALT；还可减少MCD 饮食诱导的小鼠肝脂肪蓄积以及脂肪肝。该作用与抑制肝脏脂质过氧化水平、减少细胞色素P450-2E1，TNF-α，IL-6 表达、减缓JNK 和NF-κB 的激活、增加脂肪分解的细胞色素P450 (Cyp4a10)的表达、抑制CCAAT 增强子结合蛋白β(C/EBPbeta) 的转录活性相关。

但Phyllanthus urinaria 对调控肝脂肪酸β-氧化的肝乙酰化辅酶A 氧化酶没有影响。结果提示Phyllanthus urinaria 可通过抗氧化、抑制炎症、减缓脂肪蓄积有效减轻脂肪肝。近年来研究还发现，叶下珠具有抗乙肝病毒作用。以鸭乙肝病毒逆转录酶(DHBV RT)为指标筛选确定叶下珠提取的有效部位和有效单体，体内外实验证实其可抑制HBV DNA 复制，降低鸭血清中DHBVDNA 和DNAp。

但Cor 单体对肝炎病毒的确切作用尚未明确。有学者对Cor进行结构修饰，以寻找更有效的丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制剂。此外，Cor 可抑制β-葡萄糖苷酸酶呈现保肝作用，叶下珠属植物Phyllanthus amarus50%甲醇提取物中20 μg·mL−1 与标准药物水飞蓟宾相当。

4. 抗菌作用

从Geranium Sibiricum L. 的乙醇提取物中分离出有较强抗菌活性的鞣花酸等物质，其中以柯里拉京活性最强，对金黄色葡萄球菌的抑菌浓度(琼脂双倍稀释法)为25 μg·mL。从熊果提取物中分离出有效成分柯里拉京可显著性增强β-内酰胺类抗生素如苯唑西林、头孢美唑的抗耐甲氧西林金葡菌作用，使其MICs 降低100~2 000倍，二者为协同作用。但对其他类抗生素无效。

6. 抗炎作用

利用RT-PCR 检测发现柯里拉京等单宁类化合物可诱导利曼原虫感染的巨噬细胞样细胞RAW264.7 的NO 合酶和细胞因子样基因表达。进一步的作用机制研究表明Cor 可通过阻断NF-κB 激活显著性减少LPS 诱导的RAW264.7 细胞TNF-α，IL-1β，IL-6，NO 以及COX-2 等炎性因子的表达。

7. 神经系统保护作用

随着社会进步和人类寿命的延长，神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病(AD)等正随着人口老龄化而逐渐增加。从天然产物中寻找抗老化，保护脑组织功能的有效成分己成为医药领域研究的热点。越来越多的实验和临床证据表明，氧化应激和脑内炎症都是神经退化性疾病的重要致病因素。前述抗氧化、抗炎作用提示，Cor 可能具备一定神经系统保护作用潜能。

制备^[1][2]

目前，还没有对柯里拉京化学合成的研究，因此，柯里拉京均从植物中分离提取得到。柯里拉京的提取方法很多，常用的方法有溶剂提取法、超声辅助提取法。近年来，许多新技术受到青睐，并在柯里拉京提取中得到运用，提高了有效成分的提取率。

1. 有机溶剂提取法

柯里拉京的有机溶剂提取多以70%乙醇渗漉、70%乙醇回流、50%丙酮-水回流等提取方式。将药材粉碎后，用10 倍量50%丙酮-水回流4 次，每次1 小时，结果柯里拉京提取率高，且克服了柯里拉京难溶于水、高温易氧化的缺点。有机溶剂提取法简单、实用、经济、适用于大规模生产，但存在着提取周期长、工序繁琐等问题。

2. 超声辅助提取法

将药材制成细粉，精密加入50%丙酮-水溶液，超声提取。并采用单因素分析法对超声辅助提取柯里拉京的工艺条件进行优化。结果显示，超声的介入能显著缩短提取时间，明显加快溶出效率，HPLC 测得的峰形，且提取完全，同时保证了稳定性。超声辅助提取法不仅可以避免高温高压破坏有效成分的化学结构，并且缩短了提取时间，提高了提取效率，但此方法不适于大规模生产。

3. 亚临界水萃取技术(SWE)

SWE 是近十多年刚刚发展起来的一种新型提取技术，国内对该技术的研究才刚刚起步，应用更是鲜见报道。用SWE 提取诃子果实中柯里拉京等多酚类物质，并对SWE 与热水提取、常压下乙醇索氏提取进行了比较，结果发现SWE 的提取效率最高。并采用正交分析法对SWE 提取柯里拉京的工艺进行优化，发现在4 MPa，水体积流量为4 ml/min、温度120 ℃时，柯里拉京提取率最高。SWE 具有省时、高效、环保等优势，在国外作为一种绿色环保技术已应用于植物有效成分提取等许多领域。

4. 高压辅助提取法(HPE)

将高压辅助提取(HPE)应用于柯里拉京等多酚的提取，并比较了HPE 与超声提取、传统提取的效率，还对HPE 提取工艺进行了优化，确定了提取条件。结果表明柯里拉京浓度、提取率、总酚含量HEP 都是最高的，适于大规模生产。新技术在植物药提取分离方面具有广泛的应用价值，但新技术在提取上的应用还不够成熟，仍存着不同层次的局限性，还需要更加深入的研究。

主要参考资料

[1] 叶下珠属植物活性成分柯里拉京研究进展(综述) 

[2] 柯里拉京药理活性研究进展