人胱抑素C(CYS-C)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人胱抑素C(CYS-C)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中胱抑素C(CYS-C)水平。

原理：用纯化的胱抑素C(CYS-C)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胱抑素C(CYS-C)，再与HRP标记的胱抑素C(CYS-C)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胱抑素C(CYS-C)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中胱抑素C(CYS-C)浓度。

人胱抑素C(CYS-C)ELISA试剂盒

操作步骤：

1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用[4][5]

用于中老年2型糖尿病患者血清胱抑素C水平与认知功能障碍的关系研究

研究中老年2型糖尿病（Type 2Diabetes Mellitus,T2DM）患者血清胱抑素C（Cystain C,Cys-C）水平与糖尿病认知功能障碍（Diabetes-associated Cognitive Decline,DACD）的关系,评估Cys-C对中老年DACD的诊断价值。

方法:随机选取中老年T2DM患者130例,应用蒙特利尔认知评估量表中文版（Montreal Cognitive Assessment-B,MoCA-B）评估患者认知功能,其中T2DM认知功能正常（T2DM-normal Cognition,T2DM-NC）组62人,T2DM认知功能障碍（DACD）组68人。收集所有患者的一般资料,检测患者的血清Cys-C、尿素、肌酐、尿微量白蛋白/尿肌酐（Ratio of Microalbumin and Creatinine,ACR）、血脂、白蛋白、球蛋白、同型半胱氨酸、维生素D3等临床生化指标,公式计算患者的体重指数（Body Mass Index,BMI）,肾小球滤过率（Glomerular Filtration Rate,GFR）等指标,运用SPSS17.0统计分析,比较2组间差异。

结果:（1）与T2DM-NC组相比,DACD组的年龄、糖尿病病程、Cys-C、尿素、ACR水平升高,GFR、白蛋白水平降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。

（2）中老年T2DM患者中,血清Cys-C浓度与年龄、肌酐、尿素、ACR、同型半胱氨酸、球蛋白等呈正相关关系（均r＞0,P＜0.05）;与糖化血红蛋白、肾小球滤过率、胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、白蛋白呈负相关关系（均r＜0,P＜0.05）。

（3）中老年T2DM患者中,血清Cys-C浓度与MoCA-B评估中的执行功能、语言流畅、定向计算、抽象等认知功能、MoCA-B总分呈负相关关系（均r＜0,P＜0.05）。

（4）年龄、血清Cys-C是中老年T2DM患者引起认知功能障碍的危险因素（均OR＞1,P＜0.05）;白蛋白是中老年T2DM患者引起认知功能障碍的保护因素（OR＜1,P＜0.05）。

（5）血清Cys-C诊断中老年DACD的ROC曲线下面积为0.654,与0.5相比差异有统计学意义（P＜0.05）,但诊断准确性偏低（P＜0.05,0.5＜Az＜=0.7）,血清Cys-C水平处于1.05mg/L时为其诊断临界值。

结论:（1）血清Cys-C是中老年T2DM患者发生认知功能障碍的危险因素;

（2）血清Cys-C对中老年T2DM患者认知功能障碍具有一定诊断作用,血清Cys-C水平超过1.05mg/L时应警惕合并认知功能障碍的可能。

参考文献

[1]Classification of type 2 diabetes mellitus with or without cognitive impairment from healthy controls using high-order functional connectivity.[J].Chen Yuna,Zhou Zhen,Liang Yi,Tan Xin,Li Yifan,Qin Chunhong,Feng Yue,Ma Xiaomeng,Mo Zhanhao,Xia Jing,Zhang Han,Qiu Shijun,Shen Dinggang.Human brain mapping.2021(14)

[2]Type 2 Diabetes and Cognitive Status in the Health and Retirement Study:A Mendelian Randomization Approach＆#13;[J].Ware Erin B.,Morataya Cristina,Fu Mingzhou,Bakulski Kelly M..Frontiers in Genetics.2021

[3]Association between secondhand smoke exposure and diabetes mellitus in 131,724 Korean never-smokers using self-reported questionnaire and cotinine levels:Gender differences.[J].Kim Byung Jin,Kim Ji Hye,Kang Jeong Gyu,Kim Bum Soo,Kang Jin Ho.Journal of diabetes.2020(1)

[4]Association of circulating cystatin C levels with type 2 diabetes mellitus:a systematic review and meta-analysis.[J].Ma Cheng-Cheng,Duan Chun-Cui,Huang Rong-Cai,Tang Hai-Qin.Archives of medical science:AMS.2020(3)

[5]李萍.中老年2型糖尿病患者血清胱抑素C水平与认知功能障碍的关系研究[D].右江民族医学院,2022.