人纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA KIT可以用于检测各种样本中纤溶酶原激活剂(PLGA)的含量。

原理：试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被纤溶酶原激活剂(PLGA)捕获抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的纤溶酶原激活剂(PLGA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA KIT

样品收集、处理及保存方法

1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

操作步骤

1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；

4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

应用^[4][5]

用于血清生物标志物对脑梗死超早期患者重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓预后预测价值的研究

探讨血清胱抑素C（Cys C）、纤维蛋白原（FIB）、同型半胱氨酸（Hcy）水平对脑梗死超早期患者重组组织型纤溶酶原激活剂（rt-PA）静脉溶栓预后的预测价值。

方法:选取发病时间在4.5h以内脑梗死患者,符合静脉溶栓治疗条件并接受rt-PA静脉溶栓者102例。收集患者入院时相关临床资料和实验室检查结果。结局指标为接受静脉溶栓治疗90d时的预后情况。根据预后情况的m RS评分将患者分为预后良好组及预后不良组。运用单因素分析及多因素logistic回归分析rt-PA静脉溶栓预后不良的影响因素。

运用ROC曲线分析血清Cys C、FIB、Hcy水平对rt-PA静脉溶栓预后不良的预测价值。结果:根据rt-PA静脉溶栓90d时m RS评分将102例患者分为两组:预后良好组57例（55.9%）,预后不良组45例（44.1%）。

1. 分析基线资料及实验室检测指标显示,预后良好组与预后不良在年龄（60.31±10.84,67.57±10.62,P=0.001）、心房颤动（6,16,P=0.020）、入院NIHSS时评分（6,15,P＜0.001）、Cys C（0.77±0.21,1.14±0.47,P＜0.001）、FIB（2.87±0.84,4.16±1.53,P＜0.001）、Hcy（11.64±4.43,13.57±4.99,P=0.041）等因素上差异显著（P＜0.05）。

2. 进一步行多因素logistic回归分析发现,入院时NIHSS评分高、血清Hcy、Cys C及Hcy水平高是致rt-PA静脉溶栓预后不良的影响因素（OR=1.419,95%CI 1.160-1.736,P=0.001;OR=11.916,95%CI 1.601-88.699,P=0.016;OR=2.610,95%CI 1.125-6.057,P=0.026;OR=1.201,95%CI 1.029-1.402,P=0.020）。

3. 血清Cys C对rt-PA静脉溶栓预后不良的诊断界值为1.05mg/L时,敏感性和特异性分别为53.3%和91.2%。血清FI B对rt-PA静脉溶栓预后不良的诊断界值为3.33g/L时,敏感性和特异性分别为73.3%和77.2%。血清Hcy对rt-PA静脉溶栓预后不良的诊断界值为11.89 umol/L时,敏感性和特异性分别为66.2%和59.6%。

结论:入院NIHSS评分高、血清Cys C、FIB及Hcy水平高是致rt-PA静脉溶栓预后不良的影响因素;血清Cys C、FIB、Hcy可能是rt-PA静脉溶栓预后不良的潜在预测因素。

参考文献

[1]Prevention of stroke:a global perspective[J].Jeyaraj D Pandian,Seana L Gall,Mahesh P Kate,Gisele S Silva,Rufus O Akinyemi,Bruce I Ovbiagele,Pablo M Lavados,Dorcas B C Gandhi,Amanda G Thrift.The Lancet.2018(1015)

[2]Prognostic significance of serum cystatin C in acute ischemic stroke patients according to lipid component levels[J].Zhengbao Zhu,Chongke Zhong,Tian Xu,Aili Wang,Yanbo Peng,Tan Xu,Hao Peng,Chung-Shiuan Chen,Jinchao Wang,Qunwei Li,Deqin Geng,Yingxian Sun,Yongqiu Li,Yonghong Zhang,Jiang He.Atherosclerosis.2018

[3]The High Cost of Stroke and Stroke Cytoprotection Research[J].Paul A.Lapchak,John H.Zhang.Translational Stroke Research.2017(4)

[4]Renal Dysfunction Is an Independent Risk Factor for Poor Outcome in Acute Ischemic Stroke Patients Treated with Intravenous Thrombolysis:A New Cutoff Value[J].Elyar Sadeghi-Hokmabadi,Demet Funda Ba?,Mehdi Farhoudi,Aliakbar Taheraghdam,Daryoush Savadi Oskouei,Mohammad Yazdchi,Maziyar Hashemilar,Nevzat Uzuner,Reshad Mirnour,Ertugrul Colak,Atilla?zcan?zdemir,Wai-Kwong Tang.Stroke Research and Treatment.2017

[5]韦薇.血清生物标志物对脑梗死超早期患者重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓预后预测价值的研究[D].广西医科大学,2019.