人蛋白聚糖(PG)ELISA KIT的应用

背景^[1-3]

人蛋白聚糖(PG)ELISA KIT用于测定人血清、血浆及相关液体样本蛋白聚糖(PG)含量。

实验原理:试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被蛋白聚糖(PG)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的蛋白聚糖(PG)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人蛋白聚糖(PG)ELISA KIT

样本处理及要求

1.血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.组织匀浆：用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于血清正五聚体蛋白-3、多配体蛋白聚糖-4在儿童慢性心力衰竭中的变化及临床意义研究

通过检测HF患儿治疗前后、不同原发病、不同心功能分级血清中PTX-3、SDC-4水平变化及其与心脏重塑指标的相关性,探讨其在儿童CHF中的诊断、病情评估的应用价值。

方法：入选CHF的50例患儿作为心衰组。根据原发病不同,分为扩张型心肌病（DCM）组,共22例;心肌致密化不全（NVM）组,共13例;心内膜弹力纤维增生症（EFE）组,共15例。按照治疗前后不同,将HF患儿分为治疗前组和治疗后组。按照不同心功能分级,将其分为心功能Ⅱ级组、心功能Ⅲ级组,心功能Ⅳ级组,婴幼儿心功能分级采用改良Ross评分,其中心功能Ⅱ级组16例,心功能Ⅲ级组17例,心功能Ⅳ级组17例。另选取同期门诊体检儿童30例为健康对照组。各组心衰患儿与对照组健康儿童年龄、性别均无统计学差异（P＞0.05）。

采用酶联免疫吸附法检测血清PTX-3、SDC-4、NT-proBNP水平。超声心动图仪测量左心室射血分数（LVEF）,左心室短轴缩短率（LVFS）,舒张期末室间隔厚度（IVST）,舒张期末左室后壁厚度（PWT）,左心室舒张末期内径（LVEDd）等心脏相关指标。使用SPSS26.0统计分析软件对实验数据进行统计学分析。

符合正态分布的计量资料采用均数±标准差表示;偏态分布计量资料采用中位数M（P25,P75）表示,多组间比较采用非参数Kruskal-Wallis检验,Bonferroni校正进行两两比较。采用Spearman秩相关分析PTX-3、SDC-4与NTpro-BNP、LVEF、LVFS、LVEDd、LVMI之间的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。结果1.CHF患儿血清PTX-3、SDC-4、NT-proBNP水平治疗前均明显高于治疗后及对照组,治疗后患儿血清PTX-3、SDC-4、NT-proBNP水平高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。

血清PTX-3、SDC-4水平在心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级患儿中均高于健康对照组,心功能越差,其浓度越高,差异有统计学意义（P＜0.05）;心功能Ⅳ级组与心功能Ⅱ级组相比,血清PTX-3、SDC-4水平明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。3.DCM、NVM、EFE三组患儿血清PTX-3、SDC-4水平无显著差异（P＞0.05）。

参考文献

[1]A retrospective study on the short-term effect of high-dose spironolactone（80?mg/d）on chronic congestive heart failure[J].Tao Pan,Zhitao Tu,Jiming Liu.Medicine.2021(5)

[2]Comparative Transcriptome Profiling of Ovary Tissue between Black Muscovy Duck and White Muscovy Duck with High-and Low-Egg Production[J].Bao Xiuyu,Song Yiping,Li Tao,Zhang Shanshan,Huang Lihua,Zhang Shuya,Cao Junting,Liu Xiaolin,Zhang Jianqin.Genes.2020(1)

[3]MMP-9 mediated Syndecan-4 shedding correlates with osteoarthritis severity[J].Bollmann M.,Pinno K.,Ehnold L.I.,M?rtens N.,M?rtson A.,Pap T.,St?rke C.,Lohmann C.H.,Bertrand J..Osteoarthritis and Cartilage.2020(prep)

[4]Syndecan-4 as a Marker of Endothelial Dysfunction in Patients with Resistant Hypertension.[J].Journal of clinical medicine.2020(9)

[5]张凤华.血清正五聚体蛋白-3、多配体蛋白聚糖-4在儿童慢性心力衰竭中的变化及临床意义[D].郑州大学,2021.