四丁基硫酸氢铵在流动相中的作用

背景技术

四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系在反相液相色谱检测中常用作水相流动相，对一些结构特殊、不易分离的化合物对常常能产生优异的分离效果。

以盐酸莫西沙星注射液为例，主要有关物质包括：N-甲基杂质、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E。中国药典、欧洲药典和美国药典提供的有关物质的分析方法为反相液相色谱，以苯基键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-盐溶液(取四丁基硫酸氢铵0.5g，磷酸二氢钾1g，加水500mL，加磷酸2mL，用水稀释至1000mL)(体积比30：70)，检测波长为293nm，流速为1.3mL/min，柱温为30℃，进样体积为20μL。该流动相可有效分离莫西沙星及其杂质。

但是，四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系随着四丁基硫酸氢铵浓度的升高，稳定性逐渐降低。以上述盐酸莫西沙星的流动相为例，A泵使用乙腈，B泵使用四丁基硫酸氢铵缓冲盐溶液，该四丁基硫酸氢铵缓冲盐溶液必须临用现配，且使用时间不宜超过6小时(室温放置8小时可见明显的浑浊现象)，否则就会造成色谱峰漂移甚至出现盐在泵或色谱柱中析出导致泵和色谱柱损坏的情况。这就带来如下不便：

(1)一次不能配制太多缓冲盐，一个工作日至少要配制2次，而配制流动相是较为繁琐的事情，尤其是这种缓冲盐，需要用0.22μm滤膜过滤，每配制一次都需要清洗抽滤仪器，抽滤后还要再进行清洗，耗费时间和人力；

(2)不能在夜间不间断分析；药物分析领域的技术人员知道，为了项目进度，液相色谱仪通常是24小时工作的，通常在下班前将需要分析的样品和流动相配制好，设置好仪器分析序列，自动分析，这可以显著提高工作效率；但是因为四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系使用时间不宜超过6小时，所以无法在夜间持续运行，仪器夜间利用率低。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种性质稳定、有效期长的液相色谱检测用四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系。

本发明通过下面的技术方案得以实现：

一种液相色谱检测用四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系，溶剂为水，溶质包括四丁基硫酸氢铵和缓冲离子对，该缓冲离子对由磷酸二氢钾和磷酸组成，溶质还包括络合剂，该络合剂优选乙二胺四乙酸二钾。

优选地，1L缓冲盐体系中含有四丁基硫酸氢铵0.4-0.6g、磷酸二氢钾0.9-1.1g、含量为85％的磷酸1.9-2.1mL、乙二胺四乙酸二钾40-60mg。

优选地，1L缓冲盐体系中含有四丁基硫酸氢铵0.5g、磷酸二氢钾1g、含量为85％的磷酸2mL、乙二胺四乙酸二钾50mg。

上述四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系的制备方法：先用适量水将四丁基硫酸氢铵、磷酸二氢钾、磷酸和乙二胺四乙酸二钾溶解，再稀释定容。

上述四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系在反相液相色谱中作为流动相的用途。

优选地，上述四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系用作反相液相色谱的水相流动相，用于盐酸莫西沙星原料及其制剂中有关物质的分析检测。

本发明的优点：

本发明提供的四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系在24小时内稳定，不会出现浑浊现象；以盐酸莫西沙星有关物质分析为例，可见室温放置24小时的四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系与新配置的四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系对莫西沙星、N-甲基杂质、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E在反相色谱柱上的色谱行为基本一致。

附图说明

图1为分别以室温放置24小时的四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系、新配置的四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系作为流动相水相的HPLC色谱图；其中，A为室温放置24小时的本发明四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系，B为新配置的本发明四丁基硫酸氢铵缓冲盐体系。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步介绍本发明的技术方案。

流动相的配制及稳定性观察

1、试剂来源：

水，色谱用水，自制；

四丁基硫酸氢铵，分析纯，上海君瑞生物技术有限公司；

磷酸二氢钾，分析纯，上海君瑞生物技术有限公司；

磷酸，含量85％，分析纯，南京赛泓瑞生物科技有限公司；

乙二胺四乙酸二钾，分析纯，北京拜尔迪生物技术有限公司。

2、配制方法

本发明缓冲体系：称取四丁基硫酸氢铵0.5g、磷酸二氢钾1g、含量为85％的磷酸2mL、乙二胺四乙酸二钾50mg用500mL水溶解，再加水稀释定容至1L。

对比缓冲体系：按常规方法，称取四丁基硫酸氢铵0.5g、磷酸二氢钾1g、含量为85％的磷酸2mL用500mL水溶解，再加水稀释定容至1L。

3、稳定性观察

分别将上述配制的本发明缓冲体系、对比缓冲体系装在具塞玻璃瓶中置于室温(25±2℃)条件下，每隔2h肉眼观察是否有变化。结果在8h时，对比缓冲体系可见浑浊现象，玻璃瓶看上去如同蒙上一层雾；在10h时，对比缓冲体系浑浊现象加剧，溶液中可见短纤维状悬浮物；本发明缓冲体系在观察的24h内未见浑浊现象。