内蒙胎牛血清的应用

背景^[1-3]

内蒙胎牛血清是采自5-8个月胎龄牛胚胎中的胎血。此时胎牛各脏器正处生长分化阶段，血中含有丰富的生长发育因子，非常适合各种细胞的培养，一旦胚胎发育完全这些因子自动消失。因此8个月胎龄以上的牛胚胎，已接近足月，不能作为胎牛血清的原料来使用。

内蒙胎牛血清是由胎牛血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，其组成成份大部分已知，但还有一部分尚不清楚，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。其中不含细胞、纤维蛋白和凝血因子。

内蒙胎牛血清

胎牛血清在细胞培养方面通常优于其他类型的血清。由于胎牛从未接触过外界，与新生牛和小牛血清相比，抗体含量明显降低，故抗体与培养细胞发生交叉反应的风险也较低，是理想的细胞生长补充剂。

胎牛血清在细胞培养中的作用：

1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调节它们所结合的物质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5.起酸碱度缓冲液作用。

6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

7.参与细胞冻存。

在细胞培养中，胎牛血清加入基础培养基的浓度大多为5%～20%（最常见为10%）的。具体到不同试验，应依据文献报导，或细胞类型或基础培养基的成分来确定浓度。

应用^[4][5]

用于不同浓度胎牛血清培养下骨髓间充质干细胞诱导为心肌样细胞的比较研究

研究不同浓度胎牛血清培养下骨髓间充质干细胞的一般特性如形态、核型、增殖动力学、表型特点和分化成心肌样细胞潜能等生物学性状,并在低血清浓度下培养诱导后的心肌样细胞,并观察心肌样细胞增殖和特异性蛋白的表达情况。

方法:采用全骨髓贴壁的培养方法获取大鼠的骨髓间充质干细胞（BMSCs）。在细胞传到第2代时,分为5个组,加入含有不同浓度胎牛血清（FBS）的L-DMEM培养基,FBS浓度分别为0%,2.5%,5%,7.5%,10%,并以浓度系数标记各组。取第4代BMSCs,利用MTT法在（1、3、5、7、9d）检测细胞的增殖。分别取各组传代到第4代BMCS,加入Ang II和5-Aza（Ang II 0.1μmol/l和5-Aza 10μmol/l）诱导剂诱导,24h后吸弃含有诱导剂的培养液,跟换新培养液继续培养。取诱导后各组的第1代（y P1）细胞,使用MTT法检测类心肌细胞在（1、3、5、7d）的生长活力,细胞免疫荧光化学染色法检测诱导后培养至第4周时各组中c Tn I,Cx-43两类心肌相关蛋白的表达情况,并计算其表达率。

结果:1.在5种不同浓度FBS下的L-DMEM培养液均可获得第4代BMSCs;MTT检测细胞活力（1、3、5、7、9d）结果显示,5组不同体积分数的FBS培养液均可以促进BMSCs的生长,10%组＞2.5%,5%,7.5%组＞0%组,差异有统计学意义（p＜0.05）,2.5%,5%,7.5%组组间比较,差异无统计学意义（p＞0.05）。

2. 各组BMSCs在AngⅡ和5-Aza（AngⅡ0.1μmol/L、5-Aza 10μmol/L）联合作用诱导时,能分化为类心肌样细胞。诱导后的细胞MTT检测细胞活力显示10%组＞7.5%＞5%,2.5%组＞0%组（p＜0.05）,而5%,2.5%组比较未见明显差异（p＞0.05）。各组心肌样细胞的蛋白的表达显示10%组＞7.5%＞5%,2.5%组＞0%组差别有统计学意义（p＜0.05）,而5%,2.5%组比较未见明显差异,差异无统计学意义（p＞0.05）。

结论:胎牛血清的浓度对骨髓间充质干细胞的扩增有正向作用,胎牛血清的浓度为2.5%时可以满足BMSCs的分离和扩增,且细胞活力好,要想在短期内较快获得较纯的BMSCs,可以用提高FBS浓度的办法。BMSCs经诱导后的细胞,胎牛血清浓度对其活力有正向作用,这些细胞可以产生心肌细胞所表达的c Tn I、Cx-43两组蛋白。

参考文献

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[4]Concise Review:Mesenchymal Stem/Multipotent Stromal Cells:The State of Transdifferentiation and Modes of Tissue Repair—Current Views[J].Donald G.Phinney,Darwin J.Prockop.STEM CELLS.2009(11)

[5]孙国栋.不同浓度胎牛血清培养下骨髓间充质干细胞诱导为心肌样细胞的比较[D].山西医科大学,2015.