绵羊抗TSH血清的应用

背景^[1-3]

绵羊抗TSH血清是以TSH为抗原对绵羊进行注射免疫再收集免疫合格的绵羊血制备成的抗TSH血清，只要用于TSH的血清检测实验。

促甲状腺激素（TSH）是由腺垂体分泌的激素，腺垂体分泌促甲状腺激素，一方面受下丘脑分泌的促甲状腺激素释放激素（TRH）的促进性影响，另一方面又受到甲状腺激素反馈性的抑制性影响，二者互相拮抗，它们组成下丘脑-腺垂体-甲状腺轴。

绵羊抗TSH血清

TSH是垂体前叶分泌的激素之一，其主要功能是控制、调节甲状腺的活动。测定血清（浆）中的促甲状腺激素是诊断和治疗甲状腺功能亢进症和甲状腺功能减低症以及研究下丘脑-垂体-甲状腺轴的重要指标之一。在诊断甲状腺功能低下和鉴别诊断原发性和继发（下丘脑性或垂体性）甲状腺功能低下等方面是不可缺少的工具。甲状腺功能亢进症和甲状腺功能减低症治疗时，其TSH可作为疗效的判断指标。此外还可用于观察垂体TSH的储备功能，并可进一步区别下丘脑和垂体的病变。TSH检测是查明甲状腺功能的初筛试验。游离甲状腺浓度的微小变化就会带来TSH浓度向反方向的显著调整。

1.血清TSH升高：常见于原发性甲状腺功能减退症、TSH分泌瘤、缺碘性地方性甲状腺肿、甲状腺激素抵抗综合征等。

2.血清TSH降低：常见于原发性甲状腺功能亢进症，TSH基因突变，各种垂体性疾病（如垂体腺瘤、垂体炎症、垂体出血性疾病或损伤性疾病等）影响TSH细胞功能，各种甲状腺炎的损伤期，以及临床应用大剂量糖皮质激素等

应用^[4][5]

用于TSH通过上调BKCa通道亚基表达促进主动脉平滑肌增殖的初步研究

探讨:1.甲状腺功能减退是否能在短期内造成大鼠胸主动脉发生动脉粥样硬化早期改变；2.TSH是否可以促进VSMCs异常增殖3.TSH是否通过影响VSMCs细胞中的BKCa通道而起作用；4.对可能起作用的信号通路的初步探究。

方法:体内实验:采用Wistar大鼠建立甲状腺功能减退模型,通过记录手术、HE染色观察切取组织形态学、ELISA法和比色法检测血液指标验证模型,待术后16周时取大鼠胸主动脉,行HE染色观察动脉壁形态变化,行Western Blot、组织免疫荧光及组织免疫组化染色观察相应蛋白表达情况,行组织油红O染色观察动脉壁脂质沉积情况,RT-q PCR法检测相关m RNA表达情况。

体外实验:选用人主动脉平滑肌细胞（Human Aortic Smooth Muscle Cells,HASMCs）,对照组为正常培养细胞（即TSH浓度为0ng/ml）,实验组1、实验组2及实验组3在对照组基础上,分别以1ng/ml、5ng/ml及10ng/ml的TSH为刺激条件,实验组4在对照组基础上,以5ng/ml TSH+100nmol/L IBTX为刺激条件,4个实验组刺激时间均为24h,通过CCK8、RT-q PCR、Western Blot及ELISA检测明确TSH、BKCa通道和VSMCs之间关系,并检测了c AMP在TSH刺激后的变化情况。结果:1.建立甲状腺功能减退大鼠模型:术区及术后组织可见Wistar大鼠甲状腺组织完全切除,HE染色明确大鼠颈部剥离组织为甲状腺组织,且术后28天甲减组大鼠气管周围未查见甲状腺组织特征性滤泡。术后第28天甲减组大鼠血清TT3、TT4水平较假手术组明显降低（P＜0.001）,而甲减组大鼠血清TSH水平较假手术组明显升高（P＜0.001）,两组大鼠血清中Ca2+水平无明显差异。

2. 甲状腺功能减退引起大鼠胸主动脉发生AS早期改变:术后16周,选取两组大鼠胸主动脉行油红O染色和HE染色后发现,较假手术组大鼠,甲减组大鼠血管有脂质沉积（P＜0.01）,且平滑肌层增厚、细胞排列紊乱。

3. TSH促进主动脉平滑肌细胞增殖:术后16周,选取胸主动脉行免疫荧光发现,较假手术组大鼠,甲减组大鼠血管中膜层平滑肌细胞α-SMA蛋白表达减少（P＜0.001）,而OPN蛋白表达量增加（P＜0.001）。将两组大鼠胸主动脉组织行Wstern Blot发现,较假手术组大鼠,甲减组大鼠胸主动脉cyclin A、cyclin D1及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）蛋白表达上升（P＜0.05）。在体外实验中,对HASMCs给予TSH刺激后,CCK8结果提示,TSH可刺激HASMCs增殖,且在5ng/ml时增殖率上升最明显,而当TSH浓度升至10g/ml时,增值率反而下降,但仍高于对照组。Western Blot结果提示,TSH可促进HASMCs的cyclin A、cyclin D1及PCNA增殖相关蛋白表达上升,且在TSH浓度为5ng/ml时最为明显,而当TSH浓度上升至10ng/ml时,三个蛋白的表达较实验组2却降低（P＜0.05）。

4.甲状腺功能减退大鼠引起胸主动脉早期AS改变机制初探:术后16周,较假手术组大鼠,甲减组大鼠血管中膜层平滑肌细胞BKCa通道α及β1亚基表达量升高（P＜0.01）。体外实验中,当TSH浓度为5ng/ml时,相较对照组,BKCa通道α和β1亚基表达量明显上升（P＜0.05）。ELISA结果提示,TSH浓度为5ng/ml刺激HASMCs时,细胞内的c AMP浓度明显上升（P＜0.01）。最后,当加入BKCa通道特异性阻滞剂IBTX后,与实验组2相比,实验组4的cyclin A、cyclin D1及PCNA增殖相关蛋白表达量明显降低（P＜0.05）。

参考文献

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[5]谢林浚.TSH通过上调BK_(Ca)通道亚基表达促进主动脉平滑肌增殖的初步探究[D].西南医科大学,2022.