L-γ-谷氨酰基-3-羧基-4-硝基苯胺铵盐的制备

背景

本发明涉及一种用作生化检验试剂的芳香胺类有机化合物L-γ-谷氨酰基-3-羧基-4-硝基苯胺铵盐（以下用Ⅰ表示）的制备方法。

L-γ-谷氨酰基-3-羧基-4-硝基苯胺铵盐是测定转肽酶的良好底物，临床检验中已有肯定价值。德国专利2259512公开了一种制备方法，以2-硝基-5-氨基苯甲酸与邻苯二甲酰-L-谷氨酸酐（以下用Ⅲ表示）在三-叔丁胺存在下缩合，缩合物再进行肼解，得产品。上述文献中没有提供原料的合成方法及质量要求;缩合及肼解条件不明确;肼解后产品Ⅰ与邻苯二甲酰肼的分离方法未见文献报导;产品Ⅰ的精制方法、质量标准均未见任何资料介绍。

制备方法

本发明的目的是解决上述现有技术尚有不足的问题，给出一种制备Ⅰ的有效方法。

（1）以纯度99.5%以上的3-羧基-4-硝基苯胺（以下用Ⅱ表示）为原料之一，合成路线：

（2）以[α]25D-43℃(C 1.75,1，4一二氧六环)的Ⅲ为原料之二。

（3）将以上两种原料进行缩合。缩合的温度为140℃～142℃，

（4）将以上缩合物进行肼解，肼解的温度为40℃～50℃，

（5）将所得产品Ⅰ与邻苯二甲酰肼进行分离，分离的条件为35-39℃，15个小时。

（6）对分离出的产品Ⅰ进行精制，精制溶剂为乙二醇-水-丙酮。

（7）用色谱法检测两种原料的纯度，用分光光度法测定成品Ⅰ的含量，用酶法测定成品Ⅰ的活性。

经色谱法检测，取纯度99.5%的Ⅱ11.60g与〔α〕25D-43°的Ⅲ19.20g，在140℃条件下缩合，然后在45℃条件下肼解，所得产品Ⅰ与邻苯二甲酰肼在39℃条件下分离，过程约15小时，将分离出的产品Ⅰ在乙二醇-水-丙酮溶剂中精制，即得纯度ε为1.17×10⁴的成品Ⅰ8.8g。

本发明方法制备的产品Ⅰ（L-γ-谷氨酰基-3-羧基-4-硝基苯胺铵盐），经分光光度法测定其纯度ε值为1.17×104，无杂质，与Sigma公司进口产品Ⅰ基本一致，临床应用酶法进行活性检测，在未加激活剂的情况下，相当于Sigma公司产品活性92%.