人封闭抗体(BA)ELISA 试剂盒的应用

背景^[1-3]

人封闭抗体(BA)ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人封闭抗体(BA)的含量。

实验原理

人封闭抗体(BA)ELISA试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人封闭抗体(BA)捕获抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人封闭抗体(BA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人封闭抗体(BA)ELISA试剂盒

样品收集、处理及保存方法：

1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：edta、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

[实验结果计算]

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于安子合剂治疗同种免疫性复发性流产临床疗效及对BA和Treg的影响研究

通过观察非孕期同种免疫性复发性流产患者治疗前后的临床症状改善情况、血浆封闭抗体（BA）和血清Treg水平的变化,评价安子合剂的临床疗效,并探讨其免疫作用机制,从“治未病”角度,为中医药防治同种免疫性复发性流产提供临床依据。

方法:收集非孕期证属肾虚血热夹瘀型同种免疫性复发性流产患者60例,用数字表法随机分为治疗组和对照组各30例。治疗组口服安子合剂,125ml,每日2次;对照组口服固肾安胎丸,6g,每日3次,4周为一疗程,观察三个疗程。对两组患者治疗前后临床症状、封闭抗体、血清Treg水平的变化,通过SPSS22.0软件对数据进行统计分析,评价安子合剂的临床疗效,分析其作用机理。

结果:（1）中医证候积分及疗效:治疗组治疗前中医证候积分为12.03±2.06,治疗后中医证候积分为4.17±2.68;对照组治疗前中医证候积分为11.53±1.87,治疗后中医证候积分为5.80±2.51;两组治疗后中医证候积分值均显著下降（P＜0.01）,治疗组下降幅度优于对照组（P＜0.05）;治疗组和对照组的中医证候总有效率分别为90.00%和76.67%,治疗组的中医证候疗效显著优于对照组（P＜0.01）。

（2）血浆BA变化:治疗组抗CD3-BE转阳率为72.22%,对照组抗CD3-BE转阳率为36.84%,治疗组优于对照组（P＜0.05）;治疗组抗CD4-BE转阳率为60%,对照组抗CD4-BE转阳率为52.17%,治疗后两组效果相当（P＞0.05）:治疗组抗CD8-BE转阳率为82.35%,对照组抗CD8-BE转阳率为57.14%,治疗后两组效果相当（P＞0.05）。

（3）血清Treg水平变化:治疗组治疗前血清Treg值为5.10±2.56,治疗后血清Treg值为6.48±2.13,治疗后Treg水平显著高于治疗前（P＜0.01）;对照组治疗前血清Treg值为5.31±1.93,治疗后血清Treg值为6.46±2.09,治疗后Treg水平高于治疗前（P＜0.05）;治疗后两组疗效相当（P＞0.05）。

（4）临床综合疗效:治疗组和对照组的总有效率分别为90.00%和73.33%,治疗组综合疗效显著优于对照组（P＜0.01）。结论:安子合剂治疗非孕期同种免疫性复发性流产,临床疗效显著,不仅能明显改善患者临床症状,还能明显促进封闭抗体转阳,提高血清Treg的水平,调节机体的免疫功能。推测安子合剂的作用机制,可能与增强封闭抗体的封闭效率,促进外周血Treg细胞增殖活化,增强机体的免疫耐受,达到预防再次流产的发生相关。

参考文献

[1]The paradox of Th17 cell functions in tumor immunity[J].Zahra Asadzadeh,Hamed Mohammadi,Elham Safarzadeh,Maryam Hemmatzadeh,Ahmad Mahdian-shakib,Farhad Jadidi-Niaragh,Gholamreza Azizi,Behzad Baradaran.Cellular Immunology.2017

[2]Antiphospholipid and antioangiogenic activity in females with recurrent miscarriage and antiphospholipid syndrome[J].Hector F Pelusa,Eleonora Pezzarini,Cecilia L Basiglio,Jorge Musuruana,Mariela Bearzotti,María J Svetaz,Stella M Daniele,Hebe Bottai,Sandra MM Arriaga.Annals of Clinical Biochemistry.2017(5)

[3]Antiphospholipid syndrome and recurrent miscarriage:A systematic review and meta-analysis[J].Thaís da Silva Santos,Andressa Lorena Ieque,Hayalla Corrêa de Carvalho,Ana Maria Sell,Maria Valdrinez Campana Lonardoni,Izabel Galhardo Demarchi,Quirino Alves de Lima Neto,Jorge Juarez Vieira Teixeira.Journal of Reproductive Immunology.2017

[4]Interaction of Decidual CD 56+NK with Trophoblast Cells during Normal Pregnancy and Recurrent Spontaneous Abortion at Early Term of Gestation[J].N.Sotnikova,D.Voronin,Y.Antsiferova,E.Bukina.Scand J Immunol.2014(3)

[5]曹天澈.安子合剂治疗同种免疫性复发性流产临床疗效及对BA和Treg的影响[D].南京中医药大学,2020.