生长激素释放肽-6的合成及其应用

简介

生长激素释放肽-6在动物体内具有促进GH 释放、刺激动物食欲、促进动物生长、提高动物生产性能和免疫水平等多方面的功能，对畜牧业的生产具有重要意义[1]。此外，生长激素释放肽-6的发现为GH的调控提供了一种新的方法，其在促进GH 缺乏儿童的生长和恢复老年人GH 分泌、延缓衰老等生命科学领域获得了应用[2]。

图1 生长激素释放肽-6的结构式。

合成

图2 生长激素释放肽-6的合成路线[3]。

肽合成在标准条件下在自动摇床中使用Rink树脂进行。在DMF中以HBTU(3当量)为偶联试剂，DIEA(最初为3当量，偶联反应开始20分钟后为1当量)为碱，进行氨基酸偶联(3当量)。Fmoc去保护通过用20%的piperidine在DMF中处理树脂10和20分钟。在每个耦合和去保护步骤后，树脂分别用DMF (2x)、MeOH (2x)和DCM (2x)洗涤。侧链去保护和Aza-Peptide裂解。然后用新鲜配制的TFA/H2O/TES溶液(95:2.5:2.5,v/v/ v, 20 mL/g Aza-peptide resin)在室温下处理2 h。对解理混合物进行过滤，用整齐的TFA清洗树脂。滤液浓缩至约1ml，用Et2O处理。所得到的氮杂肽沉淀被过滤，用Et2O洗涤，溶解在乙腈/水(1:1,v/v)溶液中，并冻干产生轻泡沫或粉末得到生长激素释放肽-6。tR = 15.73;LRMS (EI) calcd对C46H57N12O6 (M + H)+， 873.4，M /z 437.4 (M + 2H)2+， 873.4 (M + H)+， 895.4 (M + Na)+。合成路线如图2所示。

图3 生长激素释放肽-6的合成路线[4]。

Vortex Rink酰胺4-甲基苄基胺盐酸盐盐树脂(192 mg, 0.52 mmol g-1负载)在DCM (2.0 ml, 1分钟)。让树脂膨胀(15分钟)。除去溶剂。在树脂中加入DMF (2.0 ml)。旋转树脂1分钟。除去溶剂。执行Fmoc组去保护。在树脂中加入20%哌啶/DMF溶液(1.5 ml, v/v)。将随后的混合物旋转2分钟。除去溶剂。重复这个过程，旋转15分钟。除去溶剂。用DMF洗涤任何未反应副产物的树脂6次(2.0 ml，漩涡30秒)。在DMF (1.5 ml)中溶解氨基酸(0.3 mmol)和1-[双(二甲氨基)甲基]-5-氯苯并三唑- 3-氧化六氟磷酸盐(0.12 g, 0.3 mmol, 3.0当量)。将混合物加入去保护的树脂中。使树脂旋转30秒。向树脂中加入N,N-二异丙基乙胺(111 ml, 0.6 mmol, 6.0当量)。旋涡搅拌最后的混合物1-2小时。用DMF (2.0 ml, 30秒涡流)清洗树脂最后四次。重复去保护/耦合循环。用DCM清洗肽5次(2.0 ml, 30秒漩涡)。用DMF冲洗肽。

把肽储存在冰箱里。用DMF (2.0 ml, 30秒旋涡)和DCM (2.0 ml, 30秒旋涡)进行6次树脂洗涤去除n端fmoc组。将95%三氟乙酸:2.5% (iPr)3SiH: 2.5% H2O (300 ml)的溶液添加到少量树脂珠(< 5 mg)中。将混合物旋涡搅拌3小时。在氮气流下蒸发透明液体。使用95%三氟乙酸:2.5% (iPr)3SiH: 2.5% H2O (2.0 ml)的混合物进行裂解，时间为5-7小时。将后续溶液与叔丁基甲基醚(40毫升)一起放入冰浴中冷却。10分钟后，向肽溶液中加入叔丁基甲基醚(20毫升)。冷却沉淀10分钟。将沉淀离心7分钟。轻轻倒出上层清液。在上清液中加入第二等量的叔丁基甲基醚(20毫升)。使树脂旋转30秒。将树脂离心7分钟。它的树脂。将树脂冷冻干燥20分钟。用制备高效液相色谱法(15-80% MeCN + 0.1%三氟乙酸)纯化产品得到生长激素释放肽-6。合成路线如图3所示。

应用

随着人们对生长激素释放肽-6在生长素轴以外其它作用的深入研究，生长激素释放肽-6将产生极大的临床应用价值。这类药物的进一步发展和应用，将为生命科学新领域的研究和促进人类健康开拓广阔的前景[5-6]。许多研究证明，生长激素释放肽-6基本没有副作用，至今尚未见到有关生长激素释放肽-6毒副作用的报道[7]。然而也有少数研究表明，生长激素释放肽-6对人体具有轻微的副作用，如面色发红，少量出汗。有轻微的嗜睡症状，在一些儿童中偶尔出现血清中考的松、肾上腺皮质激素和催乳激素的变化[8-10]。

参考文献

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