KOVACS氏靛基质试剂盒的应用

背景^[1-3]

KOVACS氏靛基质试剂盒用于吲哚(靛基质)试验，用于鉴定肠系细菌。

反应原理：某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。

KOVACS氏靛基质试剂盒

试剂盒组成：溶液A(对二甲氨基苯甲醛5.0g，戊醇75.0ml，浓盐酸25.0ml)

操作步骤：

1、纯培养物接种于1ml色氨酸肉汤或胰蛋白水培养基中或其他适宜的培养基中，36±1℃培养24±2h。

2、加入溶液A 2-4滴，混匀。

3、立即观察结果，也可以放置室温5-10min观察结果。

结果判断

阳性反应：在培养基上部有一红色环。

阴性反应：黄色、桔黄色或棕色。

将待试纯培养物小量接种于试验培养基管，于36±1℃培养24h时后，取约2ml培养液，加入Kovacs氏试剂2~3滴，轻摇试管，呈红色为阳性，或先加少量乙醚或二甲苯，摇动试管以提取和浓缩靛基质，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。

实验证明靛基质试剂可与17种不同的靛基质化合物作用而产生阳性反应，若先用二甲苯或乙醚等进行提取，再加试剂，则只有靛基质或5-甲基靛基质在溶剂中呈现红色，因而结果更为可靠。

应用^[4][5]

用于5种病原细菌的耐药谱测定及其β-内酰胺酶类耐药基因型分析研究

研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌和鲍曼不动杆菌等5种细菌的药物敏感谱系,并针对质粒编码的β-内酰胺酶类耐药基因的携带和分布情况进行PCR检测,旨在积累临床病原菌耐药性变异的素材,建立特异性及早筛检方法,为临床合理使用抗生素治疗多重耐药性细菌感染提供参考。

方法：利用VITEK 2 Compact全自动微生物系统,以及革兰氏染色、糖发酵试验、靛基质（Imdole）反应实验、VP试验、血浆凝固酶试验等常规鉴定法对医院获得的多株病原菌进行种属鉴定。选择了21种抗生素纸片,对临床分离、初步鉴定的5种细菌进行药敏试验。针对质粒编码的β内酰胺酶类耐药基因进行设计特异性引物,采用聚合酶链反应（PCR）扩增TEM1、CTX M、KPC、Staphy、NDM、SHV、CMY、DHA、VIM、OXA1、OXA2等基因的特异性靶序列。扩增的PCR产物在1%的琼脂糖凝胶上电泳检测,进行特异性基因片段的验证。

结果：从泰安地区某医院检验科分离并鉴定出大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌等5种319株病原菌。

药敏试验结果发现:大肠埃希菌和鲍曼不动杆菌对青霉素（PEN）、苯唑西林（OXA）、头孢唑林（CFZ）、克林霉素（CLI）、万古霉素（VAN）、庆大霉素（GEN）、四环素（TET）等的耐药率较高,耐药率分别在66.0%~94.1%之间,而大肠杆菌对拉氧头孢（MOX）和呋喃妥因（AHD）的耐药率稍低,耐药率在28.0%左右,鲍曼不动杆菌对头孢呋辛（CXM）和阿奇霉素（AZM）的耐药率较低,耐药率在33.0%左右;金黄色葡萄球菌除对米诺环素（MNO）、氯霉素（CHL）和呋喃妥因（AHD）等3中抗生素的耐药性在31.5%~47.9%之间（≤50%）以外,对其他18种抗生素均有较高的耐药性（耐药率≥56.2%）;铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌对青霉素（PEN）、苯唑西林（OXA）、阿莫西林（AMX）、克林霉素（CLI）、万古霉素（VAN）、米诺环素（MNO）耐药率较高,耐药率在67.6%~98.4%之间,而铜绿假单胞菌对拉氧头孢（MOX）和磺胺甲基异恶唑（SMZ）的耐药率较低,在22.2%~30.2%之间,肺炎克雷伯菌对头孢吡肟（FEP）、美洛培南（MEM）、拉氧头孢（MOX）和阿奇霉素（AZM）的耐药率较低,耐药率在22.1%~26.5%之间。

参考文献

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[2]The Anti-Repressor MecR2 Promotes the Proteolysis of the mecA Repressor and Enables Optimal Expression of β-lactam Resistance in MRSA [J] . Pedro Arêde,Catarina Milheiri?o,Hermínia de Lencastre,Duarte C. Oliveira.  PLOS Pathogens . 2012 (7)

[3]Staphylococcus aureus biofilms [J] . Nathan K. Archer,Mark J. Mazaitis,J. William Costerton,Jeff G. Leid,Mary Elizabeth Powers,Mark E. Shirtliff.  Virulence . 2011 (5)

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[5]崔南南. 5种病原细菌的耐药谱测定及其β-内酰胺酶类耐药基因型分析[D].泰山医学院,2017.