5-三磷酸肌醇受体1抗体的应用
发布日期:2022/10/19 9:31:41
背景[1-3]
5-三磷酸肌醇受体1抗体是一类可以特异性结合5-三磷酸肌醇受体1的多克隆抗体,主要用于体外检测5-三磷酸肌醇受体1的WB、Elisa、IP、IF、IHC等免疫学实验。
5-三磷酸肌醇受体1在受到肌醇1,4,5-三磷酸的刺激后,该受体介导钙从内质网释放。该基因的突变导致15型脊髓小脑共济失调,这是一种与小脑疾病的异质性相关的疾病。
5-三磷酸肌醇受体1抗体免疫组化
肌醇1,4,5–三磷酸与内质网系膜上受体结合,改变了受体的构象使受体钙通道打开,引起内质网系膜内的钙离子释放,细胞质内钙离子浓度因而升高。受体钙通道的开放是受细胞质中钙离子浓度调节的,表现为钙诱导钙释放通道,使较小的启动作用能很快地被放大。细胞质中的钙离子浓度升高改变钙调蛋白和其他钙传感器的构象,使它们与靶蛋白的亲和力改变,从而启动一系列生理活性,这包括:平滑肌收缩、糖原裂解、胞吐现象等。
重组小鼠I型肌醇1,4,5–三磷酸的受体的胞浆侧与肌醇1,4,5–三磷酸的共晶的晶体结构表明这一肽段的N端是肌醇1,4,5–三磷酸的结合结构域,C端是钙离子通道结构域,二者之间是调节结构域。肌醇1,4,5–三磷酸能被磷酸化成为肌醇1,3,4,5–四磷酸,参与细胞外钙离子内流的调节。
肌醇1,3,4,5–四磷酸能被去磷酸化生成肌醇1,4,5–三磷酸。肌醇1,4,5–三磷酸在细胞中的转换率很高。在降解过程中先后被磷酸酯酶作用生成肌醇二磷酸、肌醇一磷酸、肌醇。在合成过程中甘油二酯通过二酰基甘油激酶与磷脂胞苷转移酶的作用生成CDP二酰基甘油。它与肌醇在CDP二酰基甘油–肌醇三磷酸脂酰转移酶的作用下生成磷脂酰肌醇。磷脂酰肌醇被专一的激酶逐步磷酸化生成肌醇1,4,5–三磷酸。这样就完成了磷脂酰肌醇循环。
应用[4][5]
用于1,4,5-三磷酸肌醇受体I型在缺氧诱导胰腺癌转移中的分子机制研究
目的:1、比较胰腺导管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)组织与正常胰腺组织中HIF-1α、ITPR1、EGFR、p-JAK2和STAT3蛋白分子表达的差异,并探讨这些蛋白与PDAC患者临床病理特征及预后之间的关系。2、检测缺氧诱导PC侵袭转移中的相关分子机制。3、进一步研究在缺氧状态下ITPR1敲低后对胰腺癌细胞株Panc-1体外增殖及侵袭迁移的影响。
方法:1、采用免疫组化法检测78例PDAC组织和20例正常胰腺组织中HIF-1α、ITPR1、EGFR、p-JAK2和STAT3的表达,并分析这些蛋白与PDAC患者临床病理特征及预后的关系。
2、应用实时荧光定量PCR及Western-blotting检测常氧、缺氧状态下敲低ITPR1后HIF-1α、ITPR1、EGFR、p-JAK2和STAT3的表达及沉默HIF-1α后ITPR1的表达;用双荧光素酶报告基因系统检测ITPR1启动子区域是否存在HRE,并定点突变潜在的HRE,确定ITPR1启动子区域与HIF-1α的结合位点。
3、用MTS细胞增殖实验及Transwell细胞侵袭迁移实验检测敲低ITPR1的Panc-1细胞在常氧和缺氧状态下的细胞增殖及侵袭迁移能力。
结果:1、HIF-1α、ITPR1、EGFR、p-JAK2和STAT3在PDAC中的表达均增高,且HIF-1α、ITPR1、EGFR及STAT3与PDAC的肿瘤生物学行为相关,尤其是转移,HIF-1α及EGFR的高表达可影响PDAC患者的术后生存时间。
2、缺氧可提高Panc-1中HIF-1α、ITPR1和EGFR信号转导通路的表达量,且敲低ITPR1后EGFR轴相关分子表达下降而HIF-1α表达无明显变化,沉默HIF-1α后ITPR1表达下降;ITPR1启动子区域存在HIF-1α的结合位点HRE2(-903,-916)。
3、Panc-1细胞敲低ITPR1后细胞增殖能力下降,而在常氧和缺氧条件下Panc-1细胞增殖的能力相似;在缺氧状态下体外侵袭迁移能力增强,且敲低ITPR1后Panc-1细胞的侵袭迁移能力降低。
结论:1、HIF-1α、ITPR1、EGFR、p-JAK2和STAT3在PDAC组织中的表达量均增高,且HIF-1α、ITPR1、EGFR及STAT3与PDAC的转移有关;其中,HIF-1α及EGFR高表达是影响PDAC患者术后独立的预后因素。
2、缺氧可提高Panc-1中HIF-1α、ITPR1和EGFR信号通路分子的表达量,敲低ITPR1后EGFR轴相关因子表达下降而HIF-1α的表达量无明显变化,干扰HIF-1α后ITPR1表达下降,且ITPR1启动子区域存在HIF-1α的特异性结合位点,提示ITPR1是HIF-1α的靶基因,且ITPR1可以调控EGFR、p-JAK2和STAT3的表达。
3、敲低ITPR1可降低Panc-1细胞的增殖能力,而缺氧不影响Panc-1细胞增殖能力;缺氧可增强体外侵袭迁移能力可能是通过HIF-1α调控ITPR1的表达而实现。
参考文献
[1]Inhibition of T-type calcium current in rat thalamocortical neurons by isoflurane[J].Veit-Simon Eckle,Michael R.DiGruccio,Victor N.Uebele,John J.Renger,Slobodan M.Todorovic.Neuropharmacology.2012(2)
[2]Sevoflurane Protects Ventricular Myocytes from Ca2+Paradox-mediated Ca2+Overload by Blocking the Activation of Transient Receptor Potential Canonical Channels[J].Akiko Kojima,Hirotoshi Kitagawa,Mariko Omatsu-Kanbe,Hiroshi Matsuura,Shuichi Nosaka.Anesthesiology.2011(3)
[3]Bcl-2 interaction with the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor:Role in Ca 2+signaling and disease[J].Clark W.Distelhorst,Martin D.Bootman.Cell Calcium.2011(3)
[4]Assessment of general anaesthetic cytotoxicity in murine cortical neurones in dissociated culture[J].Laura L.Campbell,Jennifer A.Tyson,Emily E.Stackpole,Kristen E.Hokenson,Hanna Sherrill,Jeanne E.McKeon,Sarah A.Kim,Scott D.Edmands,Cristina Suarez,Adam C.Hall.Toxicology.2011(1)
[5]胡惠琼.1,4,5-三磷酸肌醇受体I型在缺氧诱导胰腺癌转移中的分子机制研究[D].南方医科大学,2019.
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