肌酸激酶M型抗体的应用

背景^[1-3]

肌酸激酶M型抗体是一类可以特异性结合肌酸激酶M型的多克隆抗体，主要用于体外检测肌酸激酶M型的WB、Elisa、IP、IF、IHC等免疫学实验。

肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)(ATP:Creatine N-phosphotransferase EC 2.7.3.2)通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。

肌酸激酶有四种同功酶形式：肌肉型(MM)、脑型(BB)、杂化型(MB)和线粒体型(MiMi)。MM型主要存在于各种肌肉细胞中，BB型主要存在于脑细胞中，MB型主要存在于心肌细胞中，MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中。肌肉型肌酸激酶分子是由两个相同的亚基组成的二聚体。根据目前已经测定的兔、人、鸡、鼠肌酸激酶的一级结构，M型亚基由387个氨基酸残基组成，分子量为43 KDa左右，分子内有8个巯基，但无二硫键。大熊猫肌肉型肌酸激酶也是二聚体酶，每个亚基由376个氨基酸残基组成，分子量为42 KDa。

肌酸激酶M型抗体免疫组化

肌酸激酶的同功酶在临床诊断中有十分重要的意义，在各种病变包括肌肉萎缩和心肌梗塞发生时，人的血清中肌酸激酶水平迅速提高，目前认为在心肌梗塞的诊断中测定肌酸激酶的活性比做心电图更为可靠。心肌梗死时，肌酸激酶在起病6小时内升高，24小时达高峰，3-4日内恢复正常。其中肌酸激酶的同工酶CK-MB诊断的特异性最高。肌酸激酶因其具有重要的生理功能和临床应用价值已引起人们广泛的重视和深入的研究。

应用^[4][5]

用于乙酰胆碱及M型乙酰胆碱受体在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用研究

通过盲肠结扎穿孔法（CLP）建立SD大鼠脓毒症动物实验模型，探讨乙酰胆碱及M型乙酰胆碱受体在脓毒症6h大鼠心肌损伤中的水平变化及作用，从而为临床脓毒症伴发心肌损伤的患者治疗提供理论依据。

方法：将36只清洁级雄性SD大鼠随机分为3组：正常对照组（12只）、假手术组（12只）、CLP组（12只）。正常对照组：不作任何处理；假手术组：只开腹，关腹，不结扎和穿孔盲肠；CLP（脓毒症）组：行盲肠结扎穿孔手术。观察每组大鼠一般情况：包括肛温、心率和呼吸频率。造模后6h留取血液标本，并迅速取出心脏切取心室肌，作为病理形态学标本，其余心肌组织作为检测标本。应用酶联免疫吸附剂方法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测大鼠血清肌钙蛋白T（cTnT）的浓度、全自动生化仪测定肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）的浓度。将大鼠心肌组织标本制作成组织匀浆，应用酶联免疫吸附剂法检测其中乙酰胆碱及M型乙酰胆碱受体水平的变化。

将病理标本分为两组，一组进行HE染色，观察心肌组织大体病理改变；另一组制作电镜切片，电镜下观察组织超微结构的变化，并按Flameng分级方法对心肌线粒体进行半定量评分。对测得的数据结果采用SPSSl8.0统计软件包进行数据处理，所有数据均采用均数±标准差表示，多个样本均数比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），P＜0.05差异有统计学意义。

结果:1.CLP组大鼠造模6h后出现心率、呼吸显著加快，体温上升及嗜睡等不同程度的脓毒血症表现。正常对照组、假手术组未见相关症状出现。

2.实验测得CLP组血清肌钙蛋白T（cTnT）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）及乙酰胆碱浓度水平与假手术组、正常对照组比较，cTnT（7.62±0.62vs1.34±0.21vs1.16±0.18，P＜0.05），CK-MB（1541.23±237.58vs323.68±59.58vs250.67±45.80，P＜0.05），CK（1879.45±356.80vs358.32±67.90vs285.78±34.79，P＜0.05），Ach（678.4±99.62vs323.23±53.50vs318.58±44.85，P＜0.05），有显著升高，差异具有统计学意义。M型乙酰胆碱受体水平（241.20±27.56vs250.80±23.78vs247.56±26.52，P＞0.05）与假手术组及正常对照组比较无明显变化。

3.CLP组大鼠心肌标本HE染色显示心肌细胞水肿，炎症细胞浸润，正常对照组及假手术组未见相关病理学改变；CLP组电镜下可见心肌线粒体肿胀、脊排列紊乱部分脊断裂，线粒体空泡化；与正常对照组、假手术组心肌线粒体半定量评分明显升高（P＜0.05）。

参考文献

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[2]Early inactivation of PKCεassociates with late mitochondrial translocation of Bad and apoptosis in ventricle of septic rat[J].Ke-Li Tsai,Hsin-Jen Liang,Zheng-Dao Yang,Sheng-I Lue,Shaw-Lang Yang,Chin Hsu.Journal of Surgical Research.2014(1)

[3]The adenosine A 2A receptor—Myocardial protectant and coronary target in endotoxemia[J].Melissa E.Reichelt,Kevin J.Ashton,Xing Lin Tan,S.Jamal Mustafa,Catherine Ledent,Lea M.D.Delbridge,Polly A.Hofmann,John P.Headrick,R.Ray Morrison.International Journal of Cardiology.2013(3)

[4]α-Lipoic acid attenuates LPS-induced cardiac dysfunction through a PI3K/Akt-dependent mechanism[J].Surong Jiang,Weina Zhu,Chuanfu Li,Xiaojin Zhang,Ting Lu,Zhengnian Ding,Kejiang Cao,Li Liu.International Immunopharmacology.2013(1)

[5]张振飞.乙酰胆碱及M型乙酰胆碱受体在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用研究[D].河北联合大学,2014.