白桦脂酮酸的制备

背景及概述^[1][2]

白桦脂酮酸是一种广泛分布于多种植物中的五环三萜类化合物，在白桦树皮中的含量为0.25～2％(以干品计)。白桦脂酮酸具有抗肿瘤、抗病毒和抗炎等生物活性，其中以抗黑色素瘤而闻名。研究发现，白桦脂酮酸能诱导癌细胞凋亡(apoptosis)，抑制肿瘤生长和对抗血管新生，且对于正常细胞与癌细胞间具有选择性的毒杀作用，展现其在癌症治疗的潜力。除此以外，白桦脂酮酸还在抗艾滋病毒方面有新的机制，这使得白桦脂酮酸成为很有开发前景的活性药物。

制备^[1-2]

方法一

在白桦树皮提取白桦脂醇工艺中，白桦脂酮酸往往随着白桦脂醇提取的废弃物而被忽略，这一部分往往被当做废弃物丢弃。研究发现，这部分废弃物中白桦脂酮酸含量达到15～20％。因此，对这部分废弃物的利用方法加以研究，从中提取高附加值的高纯度天然白桦脂酮酸具有较强的实际意义。CN201811029936.1提供一种有效地从白桦树皮提取白桦脂醇工艺产生的废弃物中制取高纯度天然的白桦脂酮酸的方法，以解决现有技术中未能有效利用白桦脂醇提取的废弃物的问题。本发明操作简单、得率高，可应用于工业生产，产品符合药用标准。步骤如下：

(1)取白桦脂醇提取工艺的废弃物体120.0g(白桦脂酮酸含量为15.3％，白桦脂醇含量为35.6％)，加入1700ml氯仿，搅拌下加入3％的氢氧化钠水溶液720ml，室温搅拌1小时，此时有淡黄色白桦脂酮酸钠盐固体析出，飘浮在氯仿上层。过滤、烘干得到白桦脂酮酸钠盐粗品24.2g(白桦脂酮酸含量为60.3％，白桦脂醇含量为1.1％)；

(2)将24.2g白桦脂酮酸钠盐粗品溶于400ml 90％的乙醇中，加入2.4g氢氧化钠固体，75℃～80℃下搅拌1小时，此时有大量金属光泽的沉淀生成。过滤得到一次纯化后的白桦脂酮酸钠盐14.3g；

(3)将12.3g一次纯化后的白桦脂酮酸钠盐加入到150ml 80％的乙醇中，搅拌下滴加浓度为3％的稀盐酸100ml，滴加完毕后继续搅拌1小时，过滤，水洗，烘干得到纯化后的白桦脂酮酸12.1g(白桦脂酮酸含量为92.3％，白桦脂醇含量为0.5％)；

(4)将12.1g纯化后的白桦脂酮酸加入到1200ml甲醇中，加热回流1小时，趁热过滤不溶物，滤液在0～5℃的环境下静置过夜，大量白色针状白桦脂酮酸晶体析出，过滤、烘干得到6.4g高纯度的天然白桦脂酮酸(白桦脂酮酸含量为98.2％，白桦脂醇含量为0.3％)。

(5)提取分离纯化过程总得率35.6％。

本制备方法从白桦脂醇提取工艺的废弃物中简单、高效分离得到高纯度白桦脂酮酸，全过程操作简单，生产周期短，成本低，纯化得到的白桦脂酮酸纯度高(白桦脂酮酸纯度≥98.0％，白桦脂醇含量≤0.5％)。本发明利用白桦树皮提取物中各种成分的性质，从白桦脂醇提取工艺的废弃物中分离得到高纯度白桦脂酮酸，使自然资源得到充分利用，该方法可以方便的应用于工业大规模生产。

方法二、

CN201710821556.0提供了一种制备白桦脂酮酸的方法，该方法操作方便，可工业化实施，尤其能解决背景技术存在的产率低，反应过程不易控制及反应条件苛刻等问题。包括以下步骤：

(1)将白桦脂醇加到一定比例的咪唑型离子液中；

(2)在步骤(1)的溶液中加入一定量的ClO₂，在一定温度下，控制搅拌转速，反应一 段时间，然后常温减压蒸馏，除去ClO₂；

(3)用一定量的乙酸乙酯对步骤(2)的溶液进行萃取，然后浓缩回收乙酸乙酯至稠 膏状，再用一定量的丙酮重结晶、过滤，得到白桦酮酸；

(4)用一定量的四氢呋喃溶剂溶解步骤(3)得到的白桦酮酸，再加入一定量的硼氢 化钠粉末，控制搅拌转速，冰水浴中反应一段时间；

(5)加入一定量的氯化铵，过滤除去硼氢化钠和析出的未反应底物等杂质，再减压蒸馏，得到白桦脂酮酸粗品；

(6)用一定量的甲醇加热溶解步骤(5)得到的白桦脂酮酸粗品至澄清，冷却、重结晶，得到白桦脂酮酸纯品。

制剂^[3]

CN201611012105.4提供一种操作简单、反应易控制、重复性高的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酮酸脂质体。

上述白桦脂酮酸脂质体的制备方法如下：

1、制备谷胱甘肽修饰的白桦脂酮酸纳米脂质体

(1)各原材料的质量比为：大豆卵磷脂：胆固醇：白桦脂酮酸＝12～20:1.3～2.1:1， 按每毫升无水乙醇加入上述三种溶质质量的总和为14.3～23.1mg，加入无水乙醇并超声，超声功率为40～80W，超声时间为10-20min，使其完全溶解得到脂质溶液；

(2)取谷胱甘肽溶解于去离子水中，得到谷胱甘肽溶液，每毫升去离子水中含0.3 ～1mg谷胱甘肽；以脂质溶液与谷胱甘肽溶液的体积比为1:1.5～3.5，磁力搅拌并且温度控 制在38～47℃，将步骤(1)获得的脂质溶液逐滴加入到的谷胱甘肽溶液中，得到脂质体悬液；

(3)将步骤(2)得到的脂质体悬液在28～35℃，100～130rpm，3～7小时进行磁力搅 拌，除去脂质体悬液中的无水乙醇，得到谷胱甘肽修饰的白桦脂酮酸纳米脂质体。

2、制备纳米花状钯-金合金包覆的白桦脂酮酸纳米脂质体

(1)以氯化钯溶液与抗坏血酸溶液的体积比为100:1～4的比例，将摩尔浓度为50～100mM的抗坏血酸溶液，滴加到摩尔浓度为0.5～1.5mM的氯化钯溶液中，迅速混合均匀，直至颜色变为浅绿色，即得到钯纳米粒子溶液，置于常温贮存，备用；

(2)将步骤(1)得到的钯纳米粒子溶液与步骤1制得的谷胱甘肽修饰的白桦脂酮酸纳 米脂质体按1:1～5的体积比混合均匀，置于摇床，25～30℃，85～115rpm，避光孵育8～16小时，即得到钯纳米粒子包覆的白桦脂酮酸纳米脂质体；

(3)按氯化金溶液与钯纳米粒子包覆的白桦脂酮酸纳米脂质体的体积比为1:0.5～1.5的比例，向步骤(2)获得的钯纳米粒子包覆的白桦脂酮酸纳米脂质体中加入摩尔浓度为2～8mM氯化金溶液，充分混匀；随后向混合液中加入摩尔浓度为50～100mM盐酸羟胺溶液，充分混合均匀，盐酸羟胺溶液与氯化金溶液的体积比为1～5：10，将其置于摇床，25～30℃，85～115rpm，孵育6～12小时，制得纳米花状钯-金包覆的白桦脂酮酸脂质体。

与现有技术相比具有如下优点：

1、在常温、常压及温和条件下完成制备，操作简单，反应易控制，重复性高。

2、制备的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酮酸脂质体的粒径更易于在肿瘤部位积累， 达到更好的治疗效果。

3、制备的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酮酸脂质体与现有的球壳状药物载体相比，各向异性比较好，其在500-900nm宽波长范围内处存在近红外吸收，具有良好的光热转化性能，使包载的抗肿瘤药物白桦脂酮酸实现可控释放。

4、制备的纳米花状钯-金包覆的白桦脂酮酸脂质体在近红外激光照射下，能够将光热治疗与化疗结合协同治疗癌症，与单一光热疗技术或单纯化疗相比更加高效、低毒。

主要参考资料

[1] CN201811029936.1 一种高纯度白桦脂酮酸的制备方法

[2] CN201710821556.0 一种制备白桦脂酮酸的方法

[3] CN201611012105.4 一种纳米花状钯?金包覆的白桦脂酮酸脂质体及其制备方法