人溶酶体相关膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人溶酶体相关膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA试剂盒是采用ELISA（酶联免疫）方法，用于测定人血清、血浆及相关液体样本中溶酶体相关膜蛋白2(HLAMP-2)的含量。

标本要求

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能人上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

人溶酶体相关膜蛋白2(HLAMP-2)ELISA试剂盒

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于系统性血管炎患者临床特点及生物标记物的相关研究

研究SV患者中红细胞分布宽度（RDW）、高迁率组蛋白B1（HMGB1）、溶酶体相关膜蛋白2（LAMP-2）及其自身抗体的表达水平,分析RDW、HMGB1、LAMP-2及其自身抗体其与SV临床指标的相关性,并评判其临床诊断及病情评估价值。

方法：选择明确诊断为SV的患者86例,同期收集与之年龄和性别相匹配的原发性高血压（EH）患者46例和健康对照（HC）者86例,收集所有研究对象的一般临床资料和血清标本,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法测定血清HMGB1水平,采用流式细胞术检测血清中IL-8和IL-23的水平。观察SV及其亚组间血清HMGB1水平变化及其与临床指标的相关性。

采用ELISA的方法检测各组间血清LAMP-2及其自身抗体水平,观察各组间血清LAMP-2及其自身抗体水平的表达差异。分析血清LAMP-2及其自身抗体水平与临床指标的关系。进一步评估LAMP-2及其自身抗体联合诊断对于高血压人群中SV患者鉴别诊断的价值。结果:部分:SV患者可见于任何年龄段,其中以30-40岁和51-60岁年龄段最为常见,男女比例约为1:1。SV亚组中,AAV患者年龄主要分布在50岁以上人群,男女比例约为1:1;PAN患者年龄主要集中在31-60岁之间,男女比例约为1:1,男性略多于女性;TA患者年龄主要分布在40岁以下人群,男女比例约为1:2.2。

此外,SV患者以肾脏受累、高血压和发热为最常见首发临床症状。SV亚组中,AAV患者最常见的首发临床表现主要为肾脏受累、肺脏受累和高血压;PAN、TA患者最常见的首发临床表现主要为高血压、发热和头痛。SV患者病程中最常见的临床表现为肾脏受累,其次为高血压。SV亚组中,AAV患者病程中的临床表现以肾脏受累、肺脏受累、高血压最为常见;PAN患者病程中的临床表现以肾脏受累、高血压、头痛最为常见;TA患者病程中的临床表现以高血压、头痛、发热最为常见。

进一步把合并高血压的SV患者根据血压水平分为Ⅰ-Ⅲ级,结果显示AAV合并高血压患者血压水平以Ⅰ-Ⅱ级为主;PAN和TA合并高血压患者血压水平以Ⅱ-Ⅲ级为主。在SV亚组中,白细胞（WBC）、红细胞沉降率（ESR）、超敏C-反应蛋白（Hs-CRP）和血清肌酐（Scr）在AAV患者中的水平显著高于PAN和TA患者;而红细胞（RBC）和血红蛋白（HB）在AAV患者中的水平显著低于PAN和TA患者。

SV活动期患者RDW水平显著高于非活动期患者和HC。此外,SV肾损伤患者RDW水平显著高于非肾损伤患者和HC。相关分析表明,RDW与伯明翰血管炎活动期评分（BVAS）、Hs-CRP、ESR、Scr和WBC呈显著正相关,与HB呈显著负相关。RDW是SV活动期发生的独立危险因素。

参考文献

[1]Clinical Usefulness and Prognostic Value of Red Cell Distribution Width in Colorectal Cancer[J].Yanfang Song,Zhengyuan Huang,Yanli Kang,Zhen Lin,Pingxia Lu,Qing Lin,Zhaolian Cai,Yingping Cao,Xianjin Zhu,Vasiliki Galani.BioMed Research International.2018

[2]Takayasu Arteritis Presenting as Renovascular Hypertension[J].Taro Horino,Osamu Ichii,Tatsuki Matsumoto,Yoshio Terada.JCR:Journal of Clinical Rheumatology.2018

[3]Clinical features and structured clinical evaluation of vasculitis[J].C.Ponte,A.F.águeda,R.A.Luqmani.Best Practice＆Research Clinical Rheumatology.2018

[4]Introduction,epidemiology and classification of vasculitis[J].Richard A.Watts,Joanna Robson.Best Practice＆Research Clinical Rheumatology.2018

[5]朱彬.系统性血管炎患者临床特点及生物标记物的相关研究[D].新疆医科大学,2019.