小鼠谷丙转氨酶(ALT)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

小鼠谷丙转氨酶(ALT)ELISA试剂盒用于测定血清、血浆及相关液体样本中的谷丙转氨酶(ALT)含量。

实验原理:小鼠谷丙转氨酶（ALT）试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠谷丙转氨酶（ALT）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠谷丙转氨酶（ALT）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

小鼠谷丙转氨酶(ALT)ELISA试剂盒

样本处理及要求：

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验结果计算

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

应用^[4][5]

用于谷丙转氨酶、谷草转氨酶的动态变化与代谢综合征关联性研究

探讨谷丙转氨酶（Alanine transaminase,ALT）、谷草转氨酶（Aspartate transaminase,AST）的动态变化与代谢综合征（Metabolic Syndrome,MetS）发生的关联,为利用ALT、AST的动态变化预测MetS的发生提供依据。

方法:回顾收集1119例健康体检者2010~2013年连续4年的体检数据,根据随访体检期间是否发生MetS将目标人群分为发生MetS组和未发生MetS组,比较两组ALT、AST指标的年平均变化率是否存在差异;利用R语言建立线性混合效应模型分析发生MetS者与未发生MetS者ALT、AST指标的动态变化趋势。利用SPSS17.0软件进行单因素以及多因素Logistic回归分析ALT、AST年平均变化率与MetS发生的关联。

结果:最终收集到1119例健康体检者的体检数据。3年间80例发生MetS,MetS累计发病率为7.1%。未发生MetS组与发生MetS组的ALT、AST年平均变化率差异均有统计学意义（ALT:Z=-3.85,P=0.000;AST:Z=-3.96,P=0.000）;ALT年平均变化率在2010、2011年诊断为MetS组与未发生MetS组差异均有统计学意义（P<0.008）;AST年平均变化率在2012年诊断为MetS组与未发生MetS组的差异有统计学意义（P<0.008）。

ALT的线性混合效应模型结果显示,在基线时,基线年龄为37岁的未发生MetS者logALT平均水平为1.2701U/L（1.258~1.282,P<0.001）,而发生MetS者的logALT要平均升高0.156U/L（0.101~0.211,P<0.001）;在未发生MetS者中,基线年龄每加1岁,logALT水平平均升高0.0034U/L（0.001~0.005,P<0.001）;基线年龄与MetS状态的负交互作用有统计学意义,即发生MetS者基线年龄每增加1岁,logALT水平反而减小0.0041U/L（-0.006-0.002,P=0.005）,说明基线年龄较小的发生MetS者,其logALT水平要高于年龄大者;测量时间点与MetS状态存在正交互作用,随访期间发生MetS者的logALT水平,在诊断为MetS前每年平均增加0.0307U/L（0.004~0.058,P<0.05）,而未发生MetS者,随访期间logALT水平几乎不随测量时点改变。

AST的线性混合效应模型显示,基线时,基线年龄为37岁的未发生MetS者logAST均值为1.3159U/L（1.308~1.324,P<0.001）,而发生MetS者logAST水平平均升高0.0426U/L（0.012~0.074,P=0.008）;未发生MetS者基线年龄每增加1岁logAST值增加0.0023U/L（0.001~0.003,P<0.001）;未发生MetS者,随访期间logAST水平每年平均下降0.0049U/L（-0.009-0.001,P=0.002）;由于基线年龄与MetS状态的负交互作用有统计学意义,发生MetS者基线年龄每增加1岁,logAST水平反而平均降低0.0019U/L（-0.004~0.000,P=0.017）。

单因素Logistic回归结果得出基线年龄增加、ALT基线水平升高、ALT与AST年平均变化率增加均是MetS发生的危险因素。多因素Logistic回归结果显示基线年龄（OR值为1.042,1.025~1.059,P<0.001）、ALT基线水平（OR值为1.037,1.022~1.052,P<0.001）以及ALT年平均变化率（OR值为1.108,1.076~1.141,P<0.001）与MetS的发生相关联。基线年龄增加、ALT水平升高、ALT年平均变化率升高是MetS发生的危险因素。

参考文献

[1]Relationship between non-alcoholic fatty liver disease,metabolic syndrome and insulin resistance in Korean adults:A cross-sectional study[J].Ji Young Kim,Choae Lee,Minsuk Oh,Jee-Aee Im,Ji-Won Lee,Sang Hui Chu,Hyangkyu Lee,Justin Y.Jeon.Clinica Chimica Acta.2016

[2]Nonalcoholic fatty liver disease is associated with an almost twofold increased risk of incident type 2 diabetes and metabolic syndrome.Evidence from a systematic review and meta‐analysis[J].Stefano Ballestri,Stefano Zona,Giovanni Targher,Dante Romagnoli,Enrica Baldelli,Fabio Nascimbeni,Alberto Roverato,Giovanni Guaraldi,Amedeo Lonardo.Journal of Gastroenterology and Hepatology.2016(5)

[3]Longitudinal association of obesity,metabolic syndrome and diabetes with risk of elevated aminotransferase levels in a cohort of Mexican health workers[J].Yvonne N.Flores,Allyn Auslander,Catherine M.Crespi,Michael Rodriguez,Zuo‐Feng Zhang,Francisco Durazo,Jorge Salmerón.Journal of Digestive Diseases.2016(5)

[4]Association between Metabolic Syndrome and Cancer[J].Mehmet Uzunlulu,Ozge Telci Caklili,Aytekin Oguz.Annals of Nutrition＆Metabolism.2016(3)

[5]罗亚仙.谷丙转氨酶、谷草转氨酶的动态变化与代谢综合征关联性研究[D].大连医科大学,2017.